ZsGreen和T-Sapphire綠色熒光蛋白
天然綠色熒光蛋白產生熒光并且穩定,但激發光接近紫外線范圍。由于紫外線需要特殊的光學考慮,并且會損壞活細胞,不適合用光學顯微鏡對活細胞成像。通過將改變65位單點突變引入殘基(S65T),綠色熒光蛋白的大激發光很容易轉移到488納米(在青色區域)。這種突變是綠色熒光蛋白流行的變體,稱為增強的GFP(EGFP),可通過BD Biosciences Clontech提供的多種載體在市場上買到。此外,可以使用為熒光素設計的常用濾光片對增強版進行成像,并且該濾光片是當前可用熒光蛋白中亮的。使用EGFP的缺點是對pH值敏感,并且二聚化趨勢較弱。
GFP 或其變體的光譜特性在于構成發色團的結構通常是在第 65–67 位上,或著是靠近該位置的殘基(例如,YFP)。除了關于發色團的主要突變以外,科學家還對其他基因位點定點誘變,以改善它們在異源性細胞系中的一些性能,包括蛋白的成熟和表達等其他因素。
Sapphire是GFP突變體,它表現出大的斯托克斯位移(Stokes shift)。接近發色團位置上的突變區域(T203I)使其激發峰和發射峰分別變成了399 nm 和511 nm。Sapphire 表現出112 nm的斯托克斯位移。Emerald 是另一種 GFP 修飾,其光穩定性和亮度都經過了改善,且它在哺乳類細胞中可以更高效地進行蛋白折疊。
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以上資料來自小編MSQ,2023.09.27
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