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細胞活性測定方法大全

時間:2023/1/10閱讀:2347
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代謝增殖測定



MTT檢測法

活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶,能使額外添加的MTT還原為不溶于水的藍紫色結晶甲瓚(Formazan),并沉積在細胞中,死細胞則無此現象。接著用二甲基亞砜(DMSO)溶解沉積在細胞中的甲瓚后,可利用酶標儀490nm波長測光吸收值,依據吸光值(OD值)計算出活細胞數量。在一定細胞數范圍內,吸光值與細胞活性成正比。

△ 圖例



XTT檢測法

與MTT原理相似,皆是利用添加物與活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶反應,并利用酶標儀測定產物光吸收值;不同于MTT法的是,XTT法還原產物是水溶性的橙黃色甲肷,不需經過二甲基亞砜(DMSO)溶解步驟,即可直接測定光吸收值,操作較MTT方便快速。當XTT與電子耦合劑作用后產生的水溶性甲肷吸光值與活細胞數成正比。

△ 圖例



DNA合成增殖實驗


BrdU檢測法

BrdU為胸腺嘧啶核苷(Thymine)的衍生物,可用于標記活細胞中新合成的DNA(細胞活性周期S期),BrdU可隨著DNA復制進入子細胞,因此在加入BrdU后分裂增殖的細胞DNA都會帶有BrdU標記,可通過抗BrdU單克隆抗體檢測,借此檢測細胞的增殖能力,但BrdU單克隆抗體檢測過程需要將部分DNA變性,使部分雙股解開成單股才能順利檢測。且BrdU為光敏性,因此需要在光線刺激較低(黑暗)的環境下操作,并避光培養。

△ 圖例



EdU檢測法

EdU原理跟BrdU檢測法很像,都是代替胸腺嘧啶(Thymine,T)滲入正在復制的DNA中,并加入能與EdU反應的熒光染料,即可利用檢測熒光值偵測細胞增殖,或在細胞組織級別作為標記追蹤等研究,實驗過程不需要經過BrdU檢測法的DNA變性處理。

△ 圖例


化學發光細胞活性測定


ATP發光法

ATP是細胞的能量直接來源,ATP發光法是通過檢測細胞內ATP含量來分析細胞增殖。市面上的原理是利用外源的螢火蟲熒光素(Luciferin)與熒光素酶(Luciferase),以細胞內含的ATP為能量來源,發生氧化反應產生生物冷光,因此可通過監測冷光光度,來對應ATP含量并判斷細胞增殖狀況。

△ 圖例



熒光染料增殖實驗


CFSE檢測法

CFSE是一種可穿透細胞膜的熒光染料,具有細胞膜通透性,能夠自由進入細胞;當CFSE擴散穿過細胞膜,會與細胞內源酯酶產生水解反應而被激發,發出綠色熒光,這些帶熒光的CFSE會進一步與細胞骨架蛋白結合,形成穩定的胞內熒光蛋白。每當細胞進行分裂增殖,胞內熒光蛋白會被平均分配到下一代細胞中,因此細胞熒光強度會隨著增殖代數增加而不斷地降低,可用流式細胞儀進一步檢測分析得出細胞分裂增殖的情況。CFSE的濃度,對于最終判斷細胞增殖結果有直接性的影響。

△ 圖例



臺盼藍細胞計數


臺盼藍(Trypan Blue)計數法

臺盼藍是一種藍色細胞活性染料,無法通過結構完整的細胞膜進入細胞內部;但細胞死后,喪失細胞膜穩定性,臺盼藍會進入細胞將細胞染成藍色,因此在細胞實驗中,常規地搭配自動細胞計數儀或血球計數板,應用于分辨活細胞和死細胞、及檢測細胞膜的完整性。

△ 圖例



Orangu™細胞計數


Orangu™計數法

Orangu™ solution是一種無細胞毒性、高靈敏度、比色法,用于測定細胞增殖和細胞毒性的細胞活性試劑。利用WST-8(細胞代謝的一種水溶性的四唑鹽)在細胞內線粒體脫氫酶作為電子介質的情況下,它被還原為橙色的甲瓚染料,且產生甲瓚染料的數量與活細胞的數量和培養時間成正比。操作簡單快速,結果可重復。

△ 圖例



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