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染料排斥法測定細胞生存力實驗

時間:2022/12/13閱讀:1594
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原理

萘黑、臺盼藍以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透過活細胞。

將細胞懸液與染料混勻,在低倍顯微鏡下檢査。

材料與儀器

胰蛋白酶
巴斯德吸管 顯微鏡 手執計數器 生存力染料 血細胞計數板

步驟

材料

無菌

受試細胞,如胰蛋白酶消化的貼壁細胞、融化冷凍的細胞或原代離散的細胞
合適的生長液 20ml
0.25% 胰蛋白酶 5ml
D-PBSA10ml

非滅菌

血細胞計數板
生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 臺盼藍或 1% 萘黑)
巴斯德吸管
顯微鏡
手執計數器

操作步驟

1. 用胰蛋白酶消化或離心與重懸,制備高濃度的細胞懸液(約1X106 個/ml)。

2. 取一塊干凈的血細胞計數板,將蓋玻片間定在適當位置上。

3 . 將一滴細胞懸液和一滴(臺盼藍)或四滴(萘黑)染料混勻。

4 . 加至血細胞計數板的計數室中。

5 . 靜置1~2min (但不要放置很久,否則活細胞會受到損傷而吸收染料)。

6 . 將計數板置于顯微鏡下,選擇10X 物鏡,利用網格線聚焦。
7 . 計數細胞總數以及著色細胞數。

8 .清洗血細胞計數板,放人盒內。

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安培生物科技有限公司介紹:

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