THP-1人單核細胞白血病細胞

細胞介紹

該細胞對乳汁珠和激活的紅細胞有吞噬作用，無表面和胞質(zhì)免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導單核細胞分化。

細胞特性

1） 來源：急性單核細胞白血病，單核細胞

2） 形態(tài)：單核細胞，懸浮

3） 含量：>1x10^6 細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

THP-1人單核細胞白血病細胞

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1） 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640（推薦0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.05 mM β－巰基乙醇(細胞培養(yǎng)級 推薦：8211)；雙抗，1%。

2） 參考傳代比例：傳代時控制細胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細胞生長至8-10 ×105cell / mL時進行傳代。

3） 參考換液頻率：傳代時換液

4） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

5） 凍存液：*培養(yǎng)液95%，DMSO 5%（使用該凍存液后，按照我?guī)斓慕?jīng)驗復蘇存活率約50%，復蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復生長）

6） 【注意事項】：

該細胞為懸浮細胞，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗以及客戶的反饋，傳代時使用【半換液法】對細胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進行傳代。

1. 您在收到我們提供的用15ml離心管發(fā)貨的細胞后，請不要通過離心的方式收集細胞，可以先準備兩個新的T25培養(yǎng)瓶，然后將細胞混合均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中，補加培養(yǎng)基到10ml。放入到37℃培養(yǎng)箱中。

2. 您在收到的是用T25培養(yǎng)瓶發(fā)貨的細胞，請先通過離心的方式收集細胞，然后將細胞重懸加入12ml按照說明書要求配置的*培養(yǎng)基吹打均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)即可。

3. thp-1懸浮細胞。該細胞在培養(yǎng)時更喜歡溫和處理，培養(yǎng)時盡量少對細胞進行離心處理以此造成對細胞的傷害。換液時不要全培養(yǎng)基更換，建議您使用【半換液法】進行傳代，添加細胞培養(yǎng)基以稀釋細胞至維持密度即可。

4. 細胞對血清質(zhì)量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進口da品牌優(yōu)質(zhì)血清進行培養(yǎng)。FBS不要滅活，如果細胞生長緩慢請嘗試使用其他FBS或暫時將FBS濃度增加到20%

5.該細胞的培養(yǎng)液中需添加β-巰基乙醇（細胞培養(yǎng)級別），若不添加，可能會對細胞狀態(tài)造成影響。

β-巰基乙醇的穩(wěn)定性有限，不可將β-巰基乙醇添加到*培養(yǎng)基中長期儲存，在每次傳代或液體添加時再添加β-巰基乙醇。

β-巰基乙醇（2-巰基yi醇）被添加到淋巴細胞或其他細胞培養(yǎng)物中，因為在培養(yǎng)基中使用的FBS中氨基酸半胱氨酸供不應求，而胱氨酸則很多。有些細胞（例如T細胞）無法將半胱氨酸轉(zhuǎn)運到細胞質(zhì)中，必須將其轉(zhuǎn)化為半胱氨酸。β-巰基乙醇將胱氨酸還原為可被細胞轉(zhuǎn)運的形式，然后轉(zhuǎn)化為細胞生長所需的半胱氨酸。  β-巰基乙醇還是一種還原劑，可以分解培養(yǎng)中細胞產(chǎn)生的許多有毒代謝產(chǎn)物，從而改善細胞周圍的環(huán)境。

6.該細胞對細胞密度較為敏感，培養(yǎng)、傳代時請注意保持細胞密度在合適的范圍（具體請參考細胞說明書）。

7..該細胞凍存后復蘇率較低，凍存時請酌情提高細胞量

8.通常情況下可以通過向正在生長的細胞中添加*培養(yǎng)基來維持細胞的生長，每7天可以將細胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中，來完成細胞的全換液。

ATCC有關(guān)thp-1細胞保持細胞活力的說明

（頻繁的細胞計數(shù)是監(jiān)測thp-1的最佳方法。這些細胞應該每2至3天通過向燒瓶中簡單加入少量新鮮培養(yǎng)基（使它們具有條件培養(yǎng)基）來培養(yǎng)。您不需要每次都離心細胞并重新傳代。當在我們的實驗室中培養(yǎng)時，到第2天，細胞通常可以擴增到具有更多培養(yǎng)基的更大的燒瓶中。當細胞密度達到8×10 5個活細胞/ ml時需要進行傳代。不允許細胞密度超過1×10（6）活細胞/ ml。）

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞換液: 通常情況下可以通過向正在生長的細胞中添加*培養(yǎng)基來維持細胞的生長，每7天可以將細胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中，來完成細胞的全換液。

3） 細胞傳代：傳代時控制細胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細胞生長至8-10 ×105cell / mL時進行傳代。

3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。   

1，細胞凍存時，取上清，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入凍存液，輕輕混勻，DMSO終濃度為5%，細胞密度2x106/支，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

1.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。