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人真皮成纖維細胞傳代培養(yǎng)和凍存要點
人真皮成纖維細胞分離自成人耳后真皮組織,成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。本公司生產(chǎn)的真皮成纖維細胞采用多種酶聯(lián)合消化法制備而來,且不含有-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。人真皮成纖維細胞在皮膚損傷及疤痕修復(fù)以及皺紋填充中具有廣闊應(yīng)用前景。
人真皮成纖維細胞傳代培養(yǎng)
1. 在顯微鏡下觀察細胞,當(dāng)細胞融合度達到90%,即可傳代。
2. 在超凈臺/安全柜中,吸掉原有培養(yǎng)基,加入PBS溶液清洗一次,加入Xeno-Free細胞消化液(AC-1001024/1001025)使之*覆蓋皿/瓶底。
3. 室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-4分鐘,顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。
4. 加入消化液2倍體積的人真皮成纖維細胞培養(yǎng)基,用移液器輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細胞,并輕輕吹打混勻,使細胞*分散。
5. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中,1000 rpm離心3 min。
6. 棄上清,加入人真皮成纖維細胞培養(yǎng)基,重懸細胞,計數(shù)。1:2-1:4比例傳代,或按2-5x104 cells/cm2 傳代,均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中,置于37℃,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意:人成纖維增殖情況與細胞密度密切相關(guān),所以傳代時細胞密度不宜過稀。
人真皮成纖維細胞凍存
1. 細胞達到90%匯合度, 吸掉原有培養(yǎng)基,PBS清洗一次。
2. 加入Xeno-Free細胞消化液(AC-1001024/1001025)使之*覆蓋皿/瓶底,室溫孵育4-5min或37℃孵育2-4min分鐘,顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。
3. 加入消化液2倍體積的人真皮成纖維細胞培養(yǎng)基,用移液槍輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細胞,并輕輕吹打混勻,使細胞*分散。
4. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中,1000 rpm離心3 min,吸掉上清。
5. 加入適量Serum-free細胞凍存液(AC-1001006),調(diào)整細胞凍存密度在1×106 cells/mL左右,每支凍存管分裝1.5-2ml。
6. 直接放入-80℃,24h后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。