PriCells: 正常人食管黏膜上皮細胞培養
PriCells: 正常人食管黏膜上皮細胞培養
實驗材料:
1. 一般采用活檢時獲得的正常食管黏膜組織
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×HBSS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和1.5g/L慶大霉素,pH7.4
3. 手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪,眼科鑷
4. 離心管(15ml、50ml)
實驗方法:
1. 食管黏膜組織放入HBSS中,在解剖顯微鏡下分離黏膜與黏膜下組織,用HBSS沖洗2-3次,將黏膜剪成約1mm3大小的組織塊。
2. 1塊/cm2的密度將植塊放入培養皿中,上皮面朝下;也可在培養皿內放入蓋玻片,將組織塊放在蓋玻片上培養。
3. 當組織塊貼壁后,加入適量培養液,培養液的量為能濕潤組織塊但不使組織塊浮起為宜,在37℃、5%CO2培養箱內靜置培養。
4. 組織塊貼壁1-3d后,補充培養液。以后每隔2-3d換液1次。
5. 植塊培養3d后,細胞從植塊邊緣遷出。1周后,細胞向外遷移擴展,并逐漸分化,細胞的形態逐漸趨向正常食管黏膜上皮細胞的形態學特征。靠近植塊的細胞體積小,類似基底細胞。外側的細胞扁平,為分化的上皮細胞。2周后,細胞開始出現凋亡形態。3周后,近側細胞減少,甚至消失。剩余的大部分細胞呈分化狀態。
PriCells提供:
1. 各種原代細胞特制基礎培養基;
2. 各種原代細胞培養特制添加劑;
3. 原代細胞分離試劑盒;
4. 原代細胞鑒定試劑盒;
5. 各種原代細胞DNA;
6. 各種原代細胞RNA;
7. 各種原代細胞蛋白質;