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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 牛或豬大血管原代內(nèi)皮細胞的分離-消化刮脫法

時間:2021-9-24 閱讀:289
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PriCells: 牛或豬大血管原代內(nèi)皮細胞的分離-消化刮脫法
實驗材料:
1.    牛或豬
2.    PBS,含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml
3.    0.1%Ⅰ型膠原酶
4.    眼科剪,眼科鑷
5.    慕絲線
6.    離心管(15ml、50ml)

實驗方法:
1.    分離牛或豬的主動脈等大血管,長15-20cm,用絲線結扎血管各分支后,取出主動脈。放入盛有含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml的PBS平皿中,縱向切開血管壁,內(nèi)皮朝上,用PBS沖洗3次。
2.    在另一平皿中加入少量0.1%Ⅰ型膠原酶溶液。37℃下消化5-10min,然后加入培養(yǎng)液終止消化。
3.    刮取內(nèi)皮細胞。用刮刀輕輕刮內(nèi)膜表面,刮刀與血管表面成60°,刮刀要輕而均勻地推進。不可刮得過深,也不要刮到血管的邊緣處,以免成纖維細胞被污染。
4.    將刮下的內(nèi)皮細胞懸液浮于培養(yǎng)液中,1000r/min,離心10min。吸去上清;再加入15ml培養(yǎng)液,用滴灌輕輕吹打,以便分散細胞團,再離心1次,并吸去上清。加入5ml培養(yǎng)液懸浮細胞,制備細胞懸液。
5.    PriCells-原代內(nèi)皮細胞特制基礎培養(yǎng)基
6.    PriCells-原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)特制添加劑
7.    PriCells-原代細胞分離試劑盒


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