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PriCells: 小鼠單個核細胞分離去除脾臟細胞懸液中的紅細胞
PriCells: 小鼠單個核細胞分離去除脾臟細胞懸液中的紅細胞
脾臟細胞懸液在進行淋巴細胞計數之前最好先去除紅細胞(RBC)。胸腺和淋巴結細胞懸液則不必去除紅細胞。脾臟細胞的亞群分離也需先去除紅細胞。
附加材料:
ACK裂解緩沖液
實驗方案:
1. 每個脾臟用約5ml裂解緩沖液懸浮脾臟細胞;一個12ml試管可用于裂解一個或兩個脾臟,也可以用50ml離心管裂解更多的脾臟。
2. 室溫孵育5min,間以搖動。
3. 加入洗液直至裝滿容器,以低速離心機上以200g離心10min后棄上清。再洗沉淀一次并以適量培養基重懸以便下一步操作(如去除死細胞、細胞計數或者細胞分離)。
附錄:ACK裂解緩沖液
8.29g NH4Cl(0.15mol/L)
1g KH2CO3(10.0mmol/L)
37.2mg Na2EDTA(0.1mmol/L)
加800ml水,用1mol/L鹽酸調PH至7.2~7.4
補加水至1L
0.2μm濾膜過濾除菌
室溫保存