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當前位置:上海富雨生物科技有限公司>>細胞庫 / 細胞培養(yǎng)>>原代細胞>> 豬骨髓間充質(zhì)干細胞(原代)
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所 在 地上海市
更新時間:2025-03-17 14:11:24瀏覽次數(shù):67次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)豬骨髓間充質(zhì)干細胞(原代)簡介:
骨髓間充質(zhì)干細胞是干細胞家族的重要成員,來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層。骨髓間充質(zhì)干細胞最初在骨髓中發(fā)現(xiàn),因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點而日益受到人們的關(guān)注。如間充質(zhì)干細胞在體內(nèi)或體外特定的誘導(dǎo)條件下,可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、心肌、內(nèi)皮等多種組織細胞,連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能,可作為理想的種子細胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復(fù)。
本公司生產(chǎn)的豬骨髓間充質(zhì)干細胞采用密度梯度離心法制備而來,細胞總量約為5×105/T25方瓶,CD29、CD44呈陽性;CD45、CD90呈陰性,細胞純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
豬骨髓間充質(zhì)干細胞(原代)使用方法:
1、您收到細胞后,請按照以下方法進行操作:
取出T25方瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時,以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的培養(yǎng)液(備注:先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞,保存種子后再嘗試自己培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長,以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡),最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng)。
2、細胞傳代:
1細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時,棄T25方瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞3次;
2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm/min,離心5min;
3棄上清,沉淀細胞用10ml培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,最后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4待細胞貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存:
1細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時,棄T25方瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞3次;
2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm/min,離心5min;
3用適當量的凍存液(培養(yǎng)液:FBS:DMSO=7:2:1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
4先將細胞凍存管放置于-20℃1h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期儲存(或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲存)。
4、細胞復(fù)蘇:
1從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2將凍存管中的細胞轉(zhuǎn)移至含5ml培養(yǎng)液無菌離心管中,1000rpm離心5min,然后加入5ml培養(yǎng)液混勻細胞,將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中,放置于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
3第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
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