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所 在 地上海市
更新時間:2025-03-17 14:17:41瀏覽次數(shù):120次
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小鼠肌腱干細(xì)胞(原代)簡介:
肌腱干細(xì)胞是一種來源于肌腱組織的間充質(zhì)干細(xì)胞,其具有多向分化潛能,并且在外源性前列腺素E2作用下異常分化。體外培養(yǎng)時該細(xì)胞群具有克隆形成能力、自我更新及多向分化潛能等干細(xì)胞的普遍特性。肌腱干細(xì)胞可以被誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞、軟骨樣細(xì)胞、骨細(xì)胞分化;在裸鼠模型中,肌腱干細(xì)胞還可以形成肌腱樣組織,軟骨樣組織以及腱-骨連接樣組織等。相比骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞而言,TSCs具有更好的克隆形成能力和增殖能力,軟骨相關(guān)基因和肌腱相關(guān)基因表達(dá)更高,具有更好的成骨、成脂和成軟骨能力,因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞。
本公司生產(chǎn)的小鼠肌腱干細(xì)胞采用酶解法制備而來,細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶,細(xì)胞純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
小鼠肌腱干細(xì)胞(原代)使用方法:
1、您收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作:
取出T25方瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液(備注:先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞,保存種子后再嘗試自己培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長,以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡),最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2、細(xì)胞傳代:
1細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時,棄T25方瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞3次;
2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm/min,離心5min;
3棄上清,沉淀細(xì)胞用10ml培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4待細(xì)胞貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存:
1細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時,棄T25方瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞3次;
2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm/min,離心5min;
3用適當(dāng)量的凍存液(培養(yǎng)液:FBS:DMSO=7:2:1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
4先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃1h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期儲存(或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲存)。
4、細(xì)胞復(fù)蘇:
1從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含5ml培養(yǎng)液無菌離心管中,1000rpm離心5min,然后加入5ml培養(yǎng)液混勻細(xì)胞,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中,放置于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
3第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
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