NEB 10-beta 大腸桿菌電轉感受態細胞

產品信息：
組成 BC401-01
NEB 10-beta Electrocompetent cells 20×50μl
pUC19（0.1ng/μl） 5μl
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。
產品說明：
NEB 10-beta電轉感受態細胞只能用于電擊轉化，不能用于熱激轉化。該菌株為DH10B衍生株，屬大腸桿菌
K12菌株，特別適用于BAC，Cosmid等大質粒骨架的文庫構建和大質?？寺』驍U增。DNA重組缺陷（recA1）
和I 型內切酶缺陷（endA1）的特點有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。該菌株具有抗T1噬菌體
感染 的特點，還可用于藍/白斑篩選實驗，檢測β-半乳糖苷酶的活性時，無需添加IPTG，只加X-gal即可。
pUC19質粒檢測感受態細胞的轉化效率大于10 10 cfu/μg。
基因型：
araD139△(ara,leu)7697 fhuA lacX74 galK16 galE15 mcrA80d(lacZ?M15)recA1 relA1 endA1 nupG rpsL rph
spoT1△(mrrhsdRMS-mcrBC)
操作方法：
1. 電極間距為 0.1cm 的電轉杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporation cuvettes）插入碎冰中，壓實冰
面，冰中靜置 5 分鐘，使電轉杯充分降溫。（電轉杯重復使用方法：每次用完后，用大量的自來水沖
洗干凈去掉菌液和 DNA，用蒸餾水洗 3 遍，將其泡在 75%乙醇中 30 分鐘，取出杯子，瀝干液體，放
在超凈臺中，使乙醇充分揮發，蓋上蓋子放干燥地方備用。）
2. 取-70℃保存的感受態細胞插入冰中，待細胞剛化凍后，加入質粒 DNA 或連接產物（洗脫或溶解質粒
的溶液中離子不能太高，或用雙蒸水稀釋，對照 pUC19 可以用無菌水稀釋到 10pg/μl），用手指管
底輕輕混勻，立即插入冰中，在超凈臺中用無菌吸頭將細胞/DNA 混合物快速轉移到電擊杯中，避免產
生氣泡，確保細胞沉到杯底，蓋上杯蓋，空管保留待用。
3. 啟動電轉儀，設置電擊參數：2.4kV，200Ω，25μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser）。用紙巾擦
掉電轉杯外部的水分，將電轉杯放入電轉槽中進行電擊。完成后，將電轉杯插入冰中，加入950μl無抗
生素的SOC或LB培養基，并將液體轉移到原來保留的感受態空管中，37℃，150-250rpm振蕩培養1小時。
4. 取 100-200μl 左右的菌液或稀釋后的菌液，涂布于含相應抗生素的 LB 平板上，倒置放于 37℃培養箱培
養 12-18 小時。
注意事項：
1. 電轉杯必須預冷。
2. 感受態細胞應該在冰水浴中化凍，加入 DNA 后應輕柔混勻，加入 DNA 的體積小于細胞體積的 1/10。
3. 一旦 DNA 加入到細胞中，電擊操作應該立即進行。
4. DNA 應該溶解在水或 TE 中，連接酶的存在會降低轉化效率，必要時需純化連接產物。
5. 電擊時，電轉杯中的氣泡、含高濃度鹽離子的 DNA 或轉化產物會導致電弧現象的發生。
6. 電擊完成后應該立刻加上 LB 或 SOC 等復蘇培養基，每分鐘延遲加入會導致 3 倍轉化效率的降低。


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