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微量凱氏定氮法介紹

閱讀:171      發(fā)布時(shí)間:2025-5-13
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  蛋白質(zhì)的定量測定方法:微量凱氏定氮法
  【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br style="box-sizing: border-box; color: rgba(0, 0, 0, 0.85); font-family: -apple-system, BlinkMacSystemFont, "Apple Color Emoji", "Segoe UI", Roboto, Ubuntu, "Helvetica Neue", Helvetica, Arial, "PingFang SC", "Hiragino Sans GB", "Microsoft YaHei UI", "Microsoft YaHei", "Source Han Sans CN", sans-serif; background-color: rgb(245, 246, 248);"/>  學(xué)習(xí)凱氏定氮法的原理和操作技術(shù)。
  微量凱氏定氮法【實(shí)驗(yàn)原理】
  凱氏定氮法用于測定有機(jī)物的含氮量,若蛋白質(zhì)的含氮量已知時(shí),則可用此法測定樣品中蛋白質(zhì)的含量。
  當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與濃硫酸共熱時(shí),其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水,而氮則轉(zhuǎn)變成氨,并進(jìn)一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程通常稱為“消化"。但是,這個反應(yīng)進(jìn)行得比較緩慢,通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應(yīng)液的沸點(diǎn),并加入硫酸銅作為催化劑,以促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。
  消化完成后,在凱氏定氮儀中加入濃堿,可使消化液中的硫酸銨分解,游離出氨,借助水蒸汽蒸餾法,將產(chǎn)生的氨蒸餾到量、濃度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,氨與溶液中氫離子結(jié)合,使溶液中的氫離子濃度降低,指示劑顏色改變,然后用標(biāo)準(zhǔn)無機(jī)鹽酸滴定,直至恢復(fù)溶液中原來的氫離子濃度為止。根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的量可計(jì)算出待測物中的總氮量。
  蛋白質(zhì)的含氮量為16%,即1克蛋白質(zhì)中的氮相當(dāng)于6.25克蛋白質(zhì),用凱氏定氮法測出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質(zhì)的含量。
  微量凱氏定氮法【實(shí)驗(yàn)材料】
  1.實(shí)驗(yàn)器材
  微量凱氏定氮儀1套;50ml凱氏燒瓶4個;移液管;錐形瓶;試管;小玻璃珠
  2.試驗(yàn)試劑
  (1)濃硫酸;30%氫氧化鈉溶液;2%硼酸溶液;標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(0.01mol/L)。
  (2)粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物:K2SO4與CuSO4·5H2O以3:1配比研磨混合。
  (3)混合指示劑(田氏指示劑):由50ml0.1%甲烯藍(lán)乙醇溶液與200ml0.1%甲基紅乙醇溶液混合配成,貯于棕色瓶中備用。
  (4)樣品溶液:配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品。
  【實(shí)驗(yàn)操作】
  1.安裝凱氏定氮儀。
  2.消化:取4個50ml凱氏燒瓶并標(biāo)號,各加1顆玻璃珠,在1號及2號瓶中各加樣品1ml,催化劑(K2SO4-CuSO4·5H2O)200mg,濃硫酸5ml。注意加樣品時(shí)應(yīng)直接送入瓶底,而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號及4號瓶中各加1ml蒸餾水和與1、2號瓶相同量的催化劑和濃硫酸,作為對照。在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行消化。
  在消化開始時(shí)應(yīng)控制火力,不要使液體沖到瓶頸。待硫酸開始分解并放出SO2白煙后,適當(dāng)加強(qiáng)火力,繼續(xù)消化,直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力,冷卻至室溫。

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