氨基酸( AA)含量檢測試劑盒（微量法）

時間：2025/4/27閱讀：100

氨基酸( AA)含量檢測試劑盒（微量法）

產品貨號：BA1044

產品規格：100管/96樣

產品內容：

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入1.33mL無水乙醇，蓋緊后充分混勻，再加入18.67 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1支，4℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水，充分溶解。

標準品：粉劑×1支，10mg半胱氨酸，4℃保存。臨用前加入8.26mL蒸餾水，得到10μmol/mL的半胱氨酸標準溶液備用。

產品說明：

動物肝臟、腎臟是氨基酸代謝的主要器官，故尿中氨基酸的變化最能反應肝、腎的生理狀態。另外，氨基酸還能反應灼傷、傷寒等方面情況。植物體內氨基酸含量對研究植物在不同條件下及不同生長發育時期氮代謝變化、植物對氮素的吸收、運輸、同化及營養狀況等有重要意義。

氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應，產生藍紫色化合物，在570 nm有特征吸收峰；通過測定570nm吸光度，來計算氨基酸含量。

需自備的儀器和用品：

臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、無水乙醇、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品的提?。?/span>

(1) 組織樣本：稱取約0.1g組織，加試劑一1mL，室溫下充分研磨，轉移到1.5mLEP管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15min；自來水冷卻后，10000rpm，4℃離心10min，取上清液，待測。

(2) 細菌或細胞樣本：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）；10000rpm，4℃離心10min，取上清液，待測。

二、測定步驟：

1、分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至570nm，蒸餾水調零。

2、操作表：（在EP管中進行）

試劑名稱（μL）	測定管	標準管	空白管
樣本	10	-	-
標準液	-	10	-
蒸餾水	-	-	10
試劑二	100	100	100
試劑三	100	100	100
試劑四	10	10	10
混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15min，冷卻后反復顛倒EP管數次， 8000rpm 離心5min后取上清，于570nm測定吸光值，分別記為A測定管、A標準管、A空白管，并計算ΔA測定管=A測定管-A空白管，ΔA標準管=A標準管-A空白管，顯色后務必在30min內測完。

三：氨基酸含量計算：

（1）按樣本質量計算

氨基酸含量（μmol /g 鮮重）=（C標準品×V標準品×ΔA測定管÷ΔA標準管）÷（W÷V樣總×V樣）

=10×ΔA測定管÷ΔA標準管÷W

（2）按蛋白濃度計算

氨基酸含量（μmol /mg prot）=（C標準品×V標準品×ΔA測定管÷ΔA標準管）÷（Cpr×V樣）

=10×ΔA測定管÷ΔA標準管÷Cpr

（3）按細菌或細胞數量計算

氨基酸含量 (μmol/10⁴cell) =(C標準品×V標準品×ΔA測定管÷ΔA標準管)÷（500×V樣÷V樣總）

=0.02×ΔA測定管÷ΔA標準管

（4）按液體體積計算

氨基酸含量（μmol/mL）=（C標準品×ΔA測定管÷ΔA標準管）×2=20×ΔA測定管÷ΔA標準管

C標準品：標準品濃度，10μmol/mL；V標準品：反應體系中加入標準品體積，0.01mL；W：樣品鮮重，g；V樣：反應體系中加入樣品體積，0.01mL；V樣總：樣品提取液總體積，1mL；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；500：細菌或細胞總數，500萬個；2：提取液體時的稀釋倍數，（V液體+V試劑一）/V液體=2。

注意事項：

1、試劑盒中試劑三和試劑四均需臨用前配制，且避光保存。

2、為保證實驗結果的準確性，需先取1-2個樣做預實驗。

3、脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應在570nm處無吸收峰，因此，570nm處測定結果不含這兩種氨基酸的量。

4、如果樣本吸光值大于0.78，建議將樣本用試劑一稀釋后進行測定。

5、因提取過程中會使蛋白變性，若使用蛋白濃度計算時需用PBS單獨提取后再測定。