磷酸化蛋白提取試劑盒

產品貨號：15231

產品規格：50T/100T

產品簡介：

本試劑盒用于哺乳動物組織和細胞中提取胞質蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為強烈，可獲得總蛋白，可用于免疫印跡實驗等基礎研究實驗，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。

產品組成：

操作步驟：

在1mL的冷裂解液中各加入10µL的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；

1. 組織總蛋白的提取

1) 稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1mL 的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個過程注意冰上操作；

2) 將組織勻漿液移入1.5mL的EP管中，4℃12000g離心30min；

3) 吸取上清至新的管中；

4) 進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。

（提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。）

2. 細胞總蛋白的提取

1) 裂解液的用量：10⁷個細胞需要裂解液1mL；

2) 貼壁細胞：棄去培養基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計算好的細胞裂解液；在冰上用細胞刮刀進行刮離細胞，將刮離的細胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min。

3) 懸浮細胞：4℃400g 離心收集細胞，用冷的PBS洗兩次細胞，同樣按細胞數加入裂解液，渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復3-4次；

4) 裂解完畢之后，將細胞裂解液4℃12000g離心30min；

5) 將上清移入新的EP管中；進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。

（提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。）

注意事項：

1. 實驗過程，所有試劑都要需要預冷或者即融，保證操作過程中的低溫環境。

2. PSMF（有毒）現用現加，因為PMSF在水溶液中會快速降解。

有效期：12個月有效。