胰蛋白酶溶液(0.1%)

產(chǎn)品貨號：T10398

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

產(chǎn)品簡介：

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后，小腸內(nèi)的腸肽酶會活化該酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點(diǎn)在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶，能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原，這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作，它會將蛋白質(zhì)水解為肽，進(jìn)而分解為氨基酸，其最適溫度約為37℃。

尚寶生物 Trypsin solution(0.1%)含0.1%胰酶、無EDTA、無酚紅，經(jīng)過濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化或者一些組織的消化。通常室溫下1min左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。抗原修復(fù)有多種方法，主要方法可簡要?dú)w納為加熱修復(fù)和非加熱抗原修復(fù)兩大類。非加熱抗原修復(fù)方法包括酶消化、真空負(fù)壓、酸水解等方法。目前主要是酶消化法，酶消化是以化學(xué)的方法來打斷醛鍵進(jìn)行修復(fù)抗原。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液

2. 顯微鏡

3. 離心機(jī)

操作步驟(僅供參考):

1. 抗原修復(fù)

①切片脫蠟至水。

②切片入H2O2甲醇溶液處理切片10min。

③自來水洗，蒸餾水洗。

④PBS洗3次，每次1min。

⑤將玻片浸入Trypsin solution(0.1%)，37℃孵育10~30min。

⑥PBS洗3次，每次3min。

⑦按選好的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。

2. 貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置1～2min，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來。此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入Trypsin solution重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g離心1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

3. 組織的消化

不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

注意事項(xiàng):

1. 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。

2. 在Trypsin solution過程中，要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。

3. Trypsin solution消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差。

4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：12個(gè)月有效。