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shRNA載體構建科研實驗技術服務介紹
閱讀:173 發布時間:2024-9-26shRNA載體構建
技術原理
首先設計根據需求設計shRNA引物一套,完成引物退火。將載體進行雙酶切反應,雙酶切后割膠回收。將shRNA和雙酶切回收后的載體,使用試劑盒進行重組成環狀片段,轉入制備好的細菌感受態細胞,對長出的單克隆菌落送測序公司進行測序鑒定,比對正確的克隆即為構建成功的shRNA表達載體。
shRNA的靶點選擇決定著對靶向基因的表達敲低效果,通常涉及3-4個shRNA靶點同時進行實驗,根據后續檢測結果確定最佳靶點后,安排后續實驗。
實驗方法

體內抑制效果強:
shRNA表達載體生物體內的抑制效果強于普通合成的siRNA,且能與組織特異性定位啟動子協同作用。
誘導表達功能:
科研人員可以通過shRNA表達載體服務建立可誘導表達系統,控制siRNA的表達。
轉染細胞易富集:
載體上可附加抗生素抗性,篩除未轉染的細胞,輕松富集有沉默潛力的細胞。
干擾效果長期有效:
shRNA表達載體能幫助研究人員獲得穩定細胞系,并保證RNA干擾的長期性。
實驗操作簡便:
shRNA表達載體將以質粒的形式寄給客戶,這種形式比一般合成的siRNA更加穩定,操作也更加簡單。同時,由于載體可重復操作,客戶使用更加方便。
優惠的價格:
shRNA表達載體的可重復操作性降低了其高通量應用的價格,滿足了siRNA客戶的大量需求。
可用于基因治療:
構建在病毒載體上的shRNA能被應用于感染基因治療核心細胞系。