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詳細介紹
產品簡介
Tuner(DE3)菌株是 BL21 菌株的 lacZY 基因 (半乳糖苷透性酶基因)突變株，此突變導致 IPTG 以均一
速度進入體系中大腸桿菌的每個細胞，產生更加嚴格、均一的濃度依賴。將具有氯m素抗性的
pLysS 質粒導入 Tuner(DE3)細胞中即是 Tuner(DE3) pLysS，其中 pLysS 表達 T7 溶菌m，可與 T7
RNA 聚合酶結合抑制其轉錄活性，進而降低目標蛋白的本底表達水平，但不干擾 IPTG 誘導的表達，
因而非常適合毒性蛋白的原核表達。該菌株染色體整合了λ噬菌體 DE3 區 (DE3 區含有 T7 噬菌體
RNA 聚合酶)，可同時表達 T7 RNA 聚合酶和大腸桿菌 RNA 聚合酶，可用于 pET 系列，pGEX，
pMAL 等質粒的蛋白表達。Tuner(DE3)pLysS 感受態細胞由特殊工藝制作，pUC18 質粒檢測轉化效
率達 107 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
Tuner(DE3)pLysS
感受態細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- ompT hsdSB (rB- mB- ) gal dcm lacY1 λ(DE3) pLysS CamR
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
無外源質粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養基（室溫或 37 ℃預熱），然后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉化產物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養箱培養過夜。
注意事項
1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優良轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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