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HB101感受態(tài) 技術(shù)新聞

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更新時間:2023-04-27 21:15:51瀏覽次數(shù):475

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
HB101感受態(tài) 公司新聞

詳細(xì)介紹

HB101:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期):                            -80℃(6個月) 

 

 

 

基因型

 

F- mcrmrr hsdS20(rB- mB-recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strRglnV44λ-

 

產(chǎn)品說明

HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的雜合產(chǎn)物(同時也是Stbl3的原始菌株)。recA13突變可有效抑制長片段末端重復(fù)區(qū)的重組,降低錯誤重組的概率;但不含核酸酶endA1突變,體內(nèi)核酸酶含量較高,提取質(zhì)粒時務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失內(nèi)切酶系統(tǒng),增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量;此菌株具有鏈霉素抗性;不存在lacIqZΔM15,不可用于藍(lán)、白斑篩選。HB101感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>5×108cfu/μg DNA。 

 

操作方法

 

1. HB101感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

 

注意事項(xiàng)

 

 

1. 感受態(tài)細(xì)胞好在冰中緩慢融化,插入冰中8鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

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