Mach1-T1:                                                       100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                         10μl

保存條件(保質期)：                                 -80℃（6個月）

基因型

F^- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(r_K^- m_K⁺) ΔrecA1398 endA1 tonA

產品說明

Mach1-T1菌株由野生型non-K-12 E. Coli W菌株改造而來，是目前生長速度較快的感受態細胞之一，在平板上 8h可見克隆，缺失核酸內切酶(endA)，提高了質粒DNA的產量和質量；重組酶缺陷型(recA1398)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩定性；lacZΔM15的存在使Mach1-T1可用于藍、白斑篩選；tonA突變賦予Mach1-T1菌株對噬菌體T1和T5的抗性。Mach1-T1感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>10⁹cfu/μg DNA。

操作方法

1. Mach1-T1感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質粒或連接產物) 并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少13小時。

注意事項

1. 感受態細胞好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。