XL1-Blue:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                     10μl

保存條件（保質(zhì)期）：                         -80℃（6個(gè)月）

基因型

recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 (r_k^-,m_k⁺), relA1 lac [F' proAB lacI^qZ?M15: Tn10 (Tet^R)]

產(chǎn)品說(shuō)明

XL1-Blue菌株能保證高拷貝質(zhì)粒穩(wěn)定復(fù)制，recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。hsdR17突變導(dǎo)致EcoK核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)缺失，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量。 lacI^qZΔM15 的存在使XL1-Blue菌株可用于藍(lán)、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素抗性。XL1-Blue感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>10⁹cfu/μg DNA。

操作方法

1. XL1-Blue感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物) 并用手打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。 

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。