詳細(xì)介紹
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:紅色豬圓線蟲PCR檢測試劑盒規(guī)格
英文名稱:Hyostrongylus rubidusPCR
貨號(hào):YS30947-R
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
相對定量分析方法 :
2-ΔΔCt
前提:目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100%且偏差在5%以內(nèi)
1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值:
ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test)
ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator)
2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值:
ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
3、計(jì)算表達(dá)水平比率:
2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值
使用方法:
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
具有下列特點(diǎn):
1.根據(jù) 指標(biāo)的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個(gè)數(shù)量級(jí),可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6.本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
注意事項(xiàng):
1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織,若為長期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。
5. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
IL-4 antibody [BVD4-1D11]原裝、分裝霉酚; 麥考酚;MPA
TNF alpha antibody [MP6-XT3]原裝、分裝霉酚; 麥考酚(標(biāo)準(zhǔn)品)
Rat monoclonal [LO-MG2b-1] Mouse IgG2b heavy chain原裝、分裝阿莫西林/羥氨芐青
Chondroitin Sulfate antibody [CS-56]原裝、分裝阿莫西林/羥氨芐青
Rat monoclonal Mouse IgG2a heavy chain (HRP) [LO-MG2a-9]原裝、分裝阿莫西林/羥氨芐青
Laminin antibody原裝、分裝阿莫西林/羥氨芐青
Laminin 2 alpha antibody [4H8-2]原裝、分裝阿莫西林(標(biāo)準(zhǔn)品)
Rat monoclonal [LO-ME-3] Mouse IgE epsilon chain (Biotin) preadsorbed原裝、分裝非諾貝特
Recombinant Human PEDF protein原裝、分裝氯化血紅素;血晶素
Recombinant human Endostatin/COL18A1 protein原裝、分裝氯化血紅素;血晶素
Recombinant Mouse IL-5 protein原裝、分裝5- 羧基熒光素二酯;5-CFDA
Recombinant Mouse IL-5 protein原裝、分裝5(6)-羧基熒光素二酯
TFAP2E antibody原裝、分裝5-氨基熒光素
Macrophage antibody [RM0029-11H3]原裝、分裝6-氨基熒光素
CD31 antibody [RM0032-1D12]原裝、分裝5(6)-氨基熒光素
Angiopoietin 2/ANG2 antibody [MM0020-1F29]原裝、分裝5-FAM, SE;5-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯
紅色豬圓線蟲PCR檢測試劑盒規(guī)格Native Human AHSG protein原裝、分裝(R)-(-)-3-羥基酯(>98.0%(GC))
CD14 antibody [47-3D6] (Phycoerythrin)原裝、分裝(R)-(-)-3-羥基酯(>98.0%(GC))
CD14 antibody [47-3D6] (Allophycocyanin)原裝、分裝(S)-(-)-1-苯醇(>98.0%(GC))
CD11b antibody [DCIS1/18] (PerCP)原裝、分裝(S)-(+)-3-基-1-戊醇(>98.0%(GC))
CD14 antibody [47-3D6] (PerCP)原裝、分裝(S)-(+)-3-基-1-戊醇(>98.0%(GC))
CD147 antibody [VJ1/9]原裝、分裝(S)-(+)-4-基-1-己醇(>98.0%(GC))
CD147 antibody [VJ1/9] (Allophycocyanin)原裝、分裝(S)-(+)-4-基-1-己醇(>98.0%(GC))
CD15 antibody [MCS-1] (Allophycocyanin)原裝、分裝(S)-(+)-5-基-1-庚醇(>96.0%(GC))
CD18 antibody [GRF1] (PerCP)原裝、分裝(S)-(+)-6-基-1-辛醇(>98.0%(GC))