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了解一下流式細胞儀的調(diào)試和校準方法
閱讀：2140 發(fā)布時間：2020-10-10
今天就跟大家來分享一下流式細胞儀的調(diào)試和校準方法，下面就讓我們一起來了解一下吧。
流式細胞儀在使用前，甚至在使用過程中都要精心進行調(diào)試，以保證工作的可靠性和佳性。調(diào)試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區(qū)的光路等。
激光強度:除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長的激光出光外，還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為大。
液流速度:可通過操作臺數(shù)字顯示監(jiān)督，調(diào)節(jié) 氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。
測量區(qū)光路調(diào)節(jié) :這是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測量區(qū)的液流、激光束、90散射測量光電系統(tǒng)垂直正交，而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。
流式細胞術(shù)中所測得的量是相對值，因此需要在使用前或使用中對系統(tǒng)進行校準或標定，這樣才能通過相對測量獲得的意義。
因而FCM中的校準具有雙重功能:儀器的準直調(diào)整和定量標度。標準樣品應該穩(wěn)定，有形成份形狀應是大小比較一致球形，樣品分散性能良好，且經(jīng)濟、容易獲得。
常用標準熒光微球作為非生物學標準樣品，雞血紅細胞做為生物學標準樣品。微球用樹脂材料制作，或標有熒光素，或不標記熒光素。
所用的雞血紅細胞標準樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4)，經(jīng)PBS清洗3次，再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細胞混合，室溫下振蕩醛化24h，后經(jīng)PBS再清洗，貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經(jīng)熒光染色，所測光信號為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光。