MSP甲基化檢測:甲基化特異性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)是一種用于檢測DNA甲基化狀態的高靈敏度技術。其基本原理是利用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,使未甲基化的胞嘧啶(C)轉化為niao嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶保持不變。隨后,設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR擴增,通過瓊脂糖凝膠電泳分析擴增產物,從而確定DNA序列的甲基化狀態。
甲基化特異性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)是一種用于檢測DNA甲基化狀態的高靈敏度技術。其基本原理是利用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,使未甲基化的胞嘧啶(C)轉化為niao嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶保持不變。隨后,設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR擴增,通過瓊脂糖凝膠電泳分析擴增產物,從而確定DNA序列的甲基化狀態。以下是MSP甲基化檢測的詳細步驟和注意事項:
MSP的基本原理是用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,未甲基化的胞嘧啶(C)轉化為niao嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶(5mC)保持不變。隨后,設計兩對特異性引物,分別針對甲基化和非甲基化序列進行PCR擴增。如果用針對甲基化DNA鏈的引物能擴增出片段,則說明該位點存在甲基化;反之,說明該位點不存在甲基化。