化工儀器網
技術文章
ColProof細胞和組織 RNA 快速提取試劑盒Col-R0101 產品介紹
閱讀：622 發布時間：2023-8-15Col-R0101 試劑盒應用 本試劑盒采用利裂解液配方在 10 分鐘內完成細胞和組織樣本的裂解、提取和純化。無需使用蛋白酶 K、無需低溫離心，無需使用有機試劑。該配方中含有 RNA 保護劑，能夠抑制RNA降解、保護RNA 完整，從而提高 RNA 產量。提取 RNA 可用于 RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文庫構建等。 本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等域。
保存條件
室溫保存一年。
自備材料
水浴鍋或金屬浴、無水乙醇、無 DNase 無 RNase 離心管、DNase I（2U/μL，或貨號QR0102）使用方法
1. 樣本處理
1.1 從動物組織中提取 RNA
1.1.1 取 20-100mg 樣本放入液氮中充分研磨后，加入 700μL 裂解液 C，顛倒混勻。或者取 20-100mg 樣本加入 700μL 裂解液 C，加入 1 顆鋼珠，放入組織研磨器中，研磨1-2 分鐘。備注：不同樣本中 RNA 含量差異很大，過多使用樣本容易導致堵塞，終導致RNA提取量下降。
1.1.2 55℃孵育 1 分鐘。
1.1.3 12,000rpm 離心 1 分鐘，取 500μL 上清。
1.1.4 加入 250μL 無水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。
1.2 從懸浮細胞中提取 RNA
1.2.1 細胞 1,000rpm 離心 5 分鐘，收集細胞沉淀。
1.2.2 細胞數量為<5x106個時，加入 500uL 解液 C。細胞數量為 5x106~1x107個時，加入 700uL 裂解液 C。輕輕吹打混勻。55C孵育 1分鐘。
1.2.3 12.000rpm 離心1 分鐘。
1.2.4 細胞數量為 5×10 6個時，取 450μL 上清。細胞數量為 5×10 6~1×10 7個時，取650μL 上清。
1.2.5 加入 0.5 倍體積無水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。
1.3 從貼壁細胞中提取 RNA
1.3.1 胰酶消化細胞后 1,000rpm 離心 5 分鐘，收集細胞沉淀。
1.3.2 細胞數量為<5×10 6個時，加入 500μL 裂解液 C。細胞數量為 5×10 6~1×10 7個時，加入700μL裂解液 C。輕輕吹打混勻。55℃孵育 1 分鐘。 1.3.3 12,000rpm 離心 1 分鐘。 1.2.4 細胞數量為><5×10 6個時，取 450μL 上清。細胞數量為 5×10 6~1×10 7個時，取650μL上清。1.2.5 加入 0.5 倍體積無水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。>為<5×10 6個時，取 450μL 上清。細胞數量為 5×10 6~1×10 7個時，取650μL上清。1.2.5 加入 0.5 倍體積無水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。
2. RNA 純化
2.1 全部加入 RNA 吸附柱中，12,000rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中廢液。
2.2 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗滌液 CW1，12,000rpm 離心 30 ，倒掉收集管中廢液。
2.3 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗滌液 CW2，12,000rpm 離心 30 ，倒掉收集管中廢液。
2.4 重復步驟 2.3 一次。
2.5 12,000rpm 離心 2 分鐘，倒掉收集管中廢液。
2.6 將 RNA 吸附柱放入無 DNase 無 RNase 離心管中，加入 30-50μL 洗脫液C，室溫放置1 分鐘。
2.7 12,000rpm 離心 2 分鐘，得到 RNA 溶液，-80℃保存。
注意事項
1. 務必在超凈臺中進行操作，常換手套，防止 RNA 降解。
2. 盡可能使用新鮮樣本進行 RNA 提取。
3. 使用無 DNase 無 RNase 的吸頭和離心管，防止 RNA 降解，常更換吸頭，防止交叉污染。
4. 為了提高洗脫效率，可提將洗脫液 C 置于 65℃水浴后再使用。
5. 根據后續試驗需求，請使用 DNase I（貨號 QR0102）進行基因組清除。