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MTT法檢測某種藥物對神經干細胞的增殖實驗報告
閱讀：2461 發布時間：2019-12-9一、 實驗儀器與試劑
表格一：實驗儀器
儀器 | 廠家 | 型號 |
細胞培養箱 | Thermo Scientific | HERA cell CO2 |
酶標儀 | Thermo Scientific | Multiskan Spectrum |
表格二：試劑
試劑 | 廠家 |
DMEM/F12 培養基 | Gibco |
MTT | Sigma |
胰酶 | 索來寶 |
DMSO | Sigma |
二、 實驗步驟
收集生長狀態良好的神經干細胞，消化并調整細胞懸液濃度，分于 96 孔板，
每孔 100μL，5000 個細胞/孔。
細胞置于 37 ℃、5% CO2培養箱中培養過夜后，小心棄去培養基。
根據藥物在細胞溶液中的終濃度使用細胞培養液配制相應的藥物儲備液，隨后加入至相應培養液中形成不同濃度的工作液（藥物在工作液中的體積比為 5%）。每孔細胞分別加入 100μL 相應的工作液，每種濃度均設 3 個復孔。同時設置正常培養孔（只加入*培養液培養的細胞）和空白孔（沒有細胞，只加入相同量的*培養液）。
37 ℃、5% CO2培養箱中培養 24h 后小心吸去上清，加入 80μL 新鮮培養液
和 20μL MTT 溶液（5 mg/mL），并繼續培養 4h。
吸掉上清，每孔加入 150μL DMSO，置搖床上低速振蕩 10 min，使結晶物充分溶解。在酶標儀 490 nm 處測量各孔的 OD 值。
計算細胞生長抑制率%
實驗組OD值-空白組OD值
＝1- ´100% 對照組OD值-空白組OD值
三、 實驗結果
藥物濃度 | 1mM | 2mM | 3mM | 4mM | 5mM |
OD 值 | 0.648678 | 0.651091 | 0.714305 | 0.777446 | 0.797002 |
0.672702 | 0.712622 | 0.760024 | 0.783670 | 0.780728 | |
0.678589 | 0.733039 | 0.778568 | 0.806155 | 0.772555 | |
0.653876 | 0.699670 | 0.739670 | 0.778650 | 0.776490 | |
0.628845 | 0.687968 | 0.777404 | 0.758746 | 0.799384 | |
均值 | 0.656538 | 0.696878 | 0.753994 | 0.780933 | 0.785232 |
細胞生長抑制率 % Mean±SD | 23.87±1.99 | 18.76±3.06 | 11.51±2.72 | 8.10±1.70 | 7.55±1.22 |
