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膠體金凍干制品的制備方法示例說(shuō)明

閱讀:3334      發(fā)布時(shí)間:2020-6-11
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免疫膠體金作為標(biāo)記物用于免疫電鏡技術(shù)是一種新的免疫學(xué)方法。免疫膠體金技術(shù)(Immune colloidal gold technique) 是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù),英文縮寫為:GICT。膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,聚合成為特定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),稱為膠體金。膠體金顆粒對(duì)蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附能力,可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、 毒素、糖蛋白、酶、激素、病毒或細(xì)菌抗原等非共價(jià)結(jié)合,形成免疫膠體 金綴合物,用于免疫檢測(cè)。

免疫膠體金常用的穩(wěn)定劑(保護(hù)劑)對(duì)免疫膠體金的穩(wěn)定性非常重要,國(guó)內(nèi)外常應(yīng)用的各 種穩(wěn)定劑:牛血清白蛋白(BSA)、葡聚糖(Dextran)、聚乙二醇20000(PEG)、 明膠(gelatin)。目前普遍使用聚乙二醇20000(PEG)作為穩(wěn)定劑。

免疫膠體金定性檢測(cè)因其快速、簡(jiǎn)便,在醫(yī)院檢驗(yàn)科已廣泛應(yīng)用,用于妊娠早期診斷的人絨毛膜促性腺激素(HCG)膠體金法診斷試劑制造及檢定規(guī)程已由中國(guó)生物制品規(guī)程公布。免疫膠體金技術(shù)常用于定性檢測(cè)微生物感染、檢測(cè)血清抗體、檢測(cè)血清C-反應(yīng)蛋白C RP等。

免疫膠體金技術(shù)快速又簡(jiǎn)便,所以廣受歡迎,但要測(cè)定結(jié)果非常準(zhǔn)確, 則免疫膠體金必須有好的穩(wěn)定性,這在免疫膠體金定量檢測(cè)中尤為重要, 是發(fā)展金標(biāo)法快速定量檢測(cè)試劑的前提。

生物制品凍干形式可以采用常溫運(yùn)輸和儲(chǔ)存,保存期長(zhǎng),大大降低低溫保存不當(dāng)帶來(lái)的失效變性等,而且凍干后試劑穩(wěn)定性好。因此采用凍干法可以制備制備膠體金凍干品、化學(xué)發(fā)光凍干品、熒光PCR凍干品等。凍干法已經(jīng)在診斷試劑行業(yè)正在崛起。

那么凍干膠體金制品和凍干PCR試劑或者其他凍干其實(shí)都是相似的原理,主要步驟如下:

1.制備抗體包被膠體金

2.制備膠體金溶液:膠體金溶液包含了穩(wěn)定劑、保護(hù)劑、緩沖液等。膠體金溶液的配置是非常關(guān)鍵的,如果配置的保護(hù)劑選擇不當(dāng)或者溶度不合適,可能在凍干過(guò)程中會(huì)發(fā)生破乳現(xiàn)象,嚴(yán)重的破乳會(huì)造成肉眼可見的顆粒凝聚。輕度的破乳引起的微量顆粒凝聚, 在檢測(cè)過(guò)程中因直徑增大而通不過(guò)微孔纖維膜,滯留在膜上的紅色凝聚顆 粒就誤報(bào)為假陽(yáng)性的結(jié)果。

3.制備膠體金凍干品:制備凍干品的凍干工藝曲線可以優(yōu)化。在控制風(fēng)險(xiǎn),獲得優(yōu)質(zhì)凍干品的同時(shí)優(yōu)化工藝曲線,可以節(jié)省凍干時(shí)間,降低成本。

   所有的凍干制品的開發(fā)工藝基本上是一致的主要包含凍干配方篩選也就是保護(hù)劑的篩選,其次是凍干曲線工藝優(yōu)化。

 

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