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HitHunter® cAMP 檢測試劑盒手冊簡介

閱讀：826 發布時間：2023-06-30

HitHunter cAMP 檢測小分子試劑盒提供了一種穩健、高靈敏度且易于使用的檢測方法，用于根據細胞中 3'-5'-環單磷酸腺苷 (cAMP) 的產生來監測 G 蛋白偶聯受體 (GPCR) 的激活。該試劑盒非常適合篩選和分析小分子。對于測試生物制劑樣品（例如血清或血漿中的粗制生物樣品、純化或未純化的抗體[抗配體或抗受體]以及雜交瘤上清液），我們建議使用專為生物制劑設計的 HitHunter cAMP Assay for Biologics和大分子應用。其他來源的細胞系也與 HitHunter cAMP 檢測兼容。

技術原理

配體結合后的GPCR激活啟動了一系列的第二信使級聯，從而導致細胞反應。該信號傳導涉及一種被稱為腺苷酸環化酶的膜結合酶。Gαs -和Gαi -偶聯受體分別通過抑制或刺激腺苷酸環化酶來調節cAMP。在HitHunter cAMP實驗中，過表達GPCRs的細胞利用GPCR的自然偶聯狀態來監測Gα的激活s -和Gαi -耦合受體。在配體刺激后，通過使用基于酶片段互補（EFC）技術的同質（無洗滌）、信號獲得競爭性免疫分析法測量細胞cAMP水平來監測GPCR的功能狀態。

GPCR cAMP路徑

在該實驗中，來自細胞的cAMP和ED標記的cAMP（ED-cAMP）競爭抗cAMP抗體（Ab）結合位點。抗體結合的ED-cAMP不能與EA互補，但未結合的ED-cAMP可以自由地補充EA形成活性酶，隨后產生發光信號。所產生的信號量與細胞中cAMP的信號量

成正比。HitHunter cAMP分析EFC技術使用了一種β-半乳糖苷酶（β-gal）酶，它被分成兩個片段，酶供體（ED）和酶受體（EA）。這些片段獨立地沒有β -gal活性；然而，在溶液中，它們迅速補充形成一個活性的β -gal酶。HitHunter的cAMP檢測試劑盒提供了一種強大的、高靈敏度的、易于使用的、基于細胞的功能檢測方法，通過cAMP的產生來研究GPCR的活性。該試劑盒包含了檢測表達Gα的cAMPHunter™細胞中cAMP所需的所有試劑s -和Gαi由小分子配體誘導的-偶聯受體。該柔性檢測系統已被設計用于96孔和384孔板格式的激動劑或拮抗劑模式。

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