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胰蛋白酶在細胞培養中發揮的作用及操作步驟
閱讀：959 發布時間：2023-8-24胰蛋白酶是細胞培養實驗中常見的一種試劑，他在細胞培養實驗中怎樣才能發揮該有的作用呢？又該如何進行實驗呢？讓我們一起來看看！
作用：
1.胰蛋白酶是一種消化酶，可分解許多脊椎動物消化系統中的蛋白質，它存在于胰液中。
2.質膜上的蛋白質負責多種功能，這些功能對于維持細胞的正常生理活動至關重要。
3.一些質膜蛋白（如鈣粘蛋白家族）是粘附蛋白，可作為錨，將細胞骨架蛋白連接到細胞外基質。這有助于細胞粘附和細胞遷移。
4.在細胞培養物中，可以將胰蛋白酶添加到培養基中，通過消化粘附蛋白從培養皿表面釋放貼壁細胞。
5.胰蛋白酶還通過消化粘附蛋白從聚集體中釋放細胞。
6.EDTA也與胰蛋白酶一起添加到細胞培養物中，以螯合培養基中的二價離子。鈣和鎂離子可能抑制胰蛋白酶的作用。
7.最終，胰蛋白酶有助于從細胞培養物中獲得單個細胞，促進細胞的下游處理。
操作步驟：
1.吸取培養基，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次，以除去殘余的血清。
2.加入適量的胰蛋白酶消化液，略蓋過細胞即可。根據細胞的特性可以增加或減少胰酶用量，室溫放置30秒至2分鐘。
3.顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化呈白茫狀;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來。
4.此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用于 后續實驗。如果發現消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化。
注意事項：
1.-20℃保存，冰袋運輸，至少1年有效。
2.應根據不同組織和細胞的性質確定最佳消化時間和胰蛋白酶的用量，消化時間不宜過長，以免影響細胞的活力。
3.解凍后宜分裝使用，避免反復凍融。