各種ELISA檢測方法講解：

　　間接法ELISA檢測：

　　用特異性抗原包被固相載體，加入待測的抗體樣品反應后，再加入酶標二抗，經底物顯色后測定。間接法ELISA需要客戶提供待檢測樣本和包被用的抗原。

　　實驗流程:

　　1. 將抗原吸附于固相載體表面；

　　2. 加待檢抗體，形成抗原-抗體復合物；

　　3. 加酶標抗體（抗抗體）；

　　4. 加入底物；

　　5. 結果判定：有色產物的生成量＝抗體量。

　　樣品要求:

　　1. 客戶需提供待檢測抗體（也可由我們代購）和包被用抗原。；

　　2. 檢測的樣本為細胞培養上清、人和動物的血清、血漿時，樣本收集后應立即-20度保存，若長期保存應-80度保存；

　　3.樣本量的要求：若一個指標做復孔檢測應不少于250ul，做單孔檢測應不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

　　夾心法ELISA檢測：

　　用*抗原或抗體包被固相載體，加入待測的抗體或抗原反應后，再加入酶標的第二抗原或抗體，經底物顯色后測定，即可計算出待測抗原的量。此方法所用抗原一般為大分子抗原，如蛋白等，不適用于多肽等半抗原。夾心法ELISA需要客戶提供待檢測標本和成對抗原或抗體（亦可由我們購買或制備抗體）。

　　實驗流程:

　　1. 將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質；

　　2. 加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時問，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物；

　　3. 加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合；

　　4. 加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。

　　樣品要求:

　　1. 客戶需提供待檢測抗體（也可由我們代購）和包被用抗原。；

　　2. 檢測的樣本為細胞培養上清、人和動物的血清、血漿時，樣本收集后應立即-20度保存，若長期保存應-80度保存；

　　3.樣本量的要求：若一個指標做復孔檢測應不少于250ul，做單孔檢測應不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

　　競爭法ELISA檢測：

　　用特異性抗體包被固相載體，同時加入酶標抗原和待測抗原的混合物樣本，待測抗原將與酶標抗原競爭與固相上抗體結合。經底物顯色后測定，計算兩組數值之差即可推出待測抗原的量。此方法常用于測定小分子抗原。競爭法ELISA需要客戶提供待檢測標本、包被抗體和酶標抗原（亦可由我們購買或制備抗原或抗體）。

　　實驗流程:

　　1. 將抗體吸附在固相載體表面；

　　2. 加入酶標抗原和待測抗原；

　　3. 加入底物；

　　4. 結果判定：對照孔與樣品孔有色產物的生成量的差與未知抗原的量成負相關。

　　樣品要求:

　　1. 客戶需提供待檢測抗體（也可由我們代購）和包被用抗原。；

　　2. 檢測的樣本為細胞培養上清、人和動物的血清、血漿時，樣本收集后應立即-20度保存，若長期保存應-80度保存；

　　3.樣本量的要求：若一個指標做復孔檢測應不少于250ul，做單孔檢測應不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

　　ELISA檢測的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。

ELISA檢測又稱為酶聯免疫吸附實驗（ELISA）基本原理

它采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產生顏色反應，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。

在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑） ②酶標記的抗原或抗體（標記物）③酶作用的底物（顯色劑）

ELISA檢測又稱為酶聯免疫吸附實驗（ELISA）測量時，抗原（抗體）先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結合成的偶聯物（標記物），此偶聯物仍保留其原免疫活性與酶活性，當偶聯物與固相載體上的抗原（抗體）反應結合后，再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。

其所生成的顏色深淺與欲測的抗原（抗體）含量成正比。 這種有色產物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計（酶標儀）加以測定。其方法簡單，方便迅速，特異性強。

ELISA檢測又稱為酶聯免疫吸附實驗（ELISA）特點

1）靈敏性高

該測定法的靈敏度來自作為報告基團的酶。*, 酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導大量的催化反應 ，產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實現了在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對其進行定量。

2）ELISA檢測又稱為酶聯免疫吸附實驗（ELISA）特異性強

其特異性來自抗體或抗原的選擇性。抗原抗體的結合實質上只發生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結合位點之間。由于兩者在化學結構和空間構型上呈互補關系，所以抗原抗體反應具有高度的特異性。