GV3101農桿菌感受態細胞

GV3101 Chemically Competent Cell

產品編碼：                          保存條件： -80℃   
產品規格:

                

GV3101農桿菌感受態細胞基因型：
C58 (rif ^R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gent^R/strep^R) Nopaline

GV3101農桿菌感受態細胞簡要說明：
 GV3101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移）。
pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質粒含有篩選標簽：Strep和gent，賦予GV3101菌株鏈霉素和慶大霉素抗性，適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作，經pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率可達10⁴cfu/μg。

GV3101農桿菌感受態細胞操作說明：

1.  取-80℃保存的農桿菌感受態于冰上待其部分融化，處于冰水混合狀態時插入冰中。

1.  每100μl感受態加1ug（體積不大于10ul）質粒DNA，用手管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、28℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
2.  加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養基，于28℃振蕩培養2~3小時。

4. 6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天（當平板只含有50ug/ml kan 時，28℃培養48h即可；平板中同時加入50ug/ml kan，20ug/ml rif 時，需28℃培養60h；如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養72-90h）。

GV3101農桿菌感受態細胞注意事項：

1.  感受態細胞在冰上融化。
2.  混入質粒時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

GV3101農桿菌電轉感受態細胞