TG1 Electroporation-Competent Cell

TG1 電擊感受態細胞基因組：
[F?  traD36 proAB lacIqZ M15] supE thi-1    (lac-proAB)    (mcrB-hsdSM)5(r –m –)
K    K
TG1 電擊感受態細胞簡要說明：

TG1 電擊感受態細胞只能用于電擊轉化，不能用于熱激轉化。TG1 來源于 E.coliK-12 菌株，是目前生 長 速度最快的克隆用大腸桿菌菌株，在平板上 37℃，7 h 可見克隆。主要的噬菌體展示用菌株，同時也 可用 于普通質粒的構建，lacIqZ M15 的存在使其可以用于藍白斑篩選等實驗；但不含核酸酶 endA1 突 變，體 內核酸酶含量較高，提取質粒時推薦使用質粒提取試劑盒中去蛋白液以去除菌體內大量的核酸酶。
-CMbio-TG1 電擊感受態細胞適用于噬菌體展示文庫的構建，經特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化 效率>0.5× 1010 cfu/μg DNA。-CMbio-
TG1 電擊感受態細胞操作說明：
1. 0.1 cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘，待其瀝干水分，正置 5   分鐘，使乙

醇充分揮發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋，冰中 靜 置 5 分鐘充分降溫。-CMbio-
2. 取-80℃保存的 TG1 電擊感受態細胞插入冰中 5 分鐘，待其融化，加入目的 DNA (質粒或連接產物) 并用手 EP 管底輕輕混勻，避免產生氣泡，立即插入冰中。-CMbio-
A.  測定轉化效率使用  1 μl 10 pg/μl 的對照質粒 pUC19；-CMbio-
B. 對于連接產物，請用乙醇沉淀 DNA 后加入適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸， DNA 濃度不超過 100 ng/μl，體積不超過 5 μl/50 μl    感受態。-CMbio-
3. 用 200 μl 槍頭(用刀切除 0.5cm  槍尖)將感受態-DNA   混合物快速移到電擊杯中，避免產生氣泡，蓋上杯蓋。

4. 啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為 BioRad 電轉儀推薦參數，也可按所用 電轉儀推薦的參數操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。-CMbio-
5. 2 分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入 1ml 不含抗生素的無菌 S.O.C. 培養基（室溫），用 1ml 槍 吹吸電擊杯底部數次混勻后，轉移到 50 ml 離心管（BD Falcon 50 ml 錐形離心管等），向離心管中 補 加 S.O.C. 培養基至  10 ml。傾斜 45 度放入搖床，37℃，225 rpm 復蘇 60    分鐘。-CMbio-
6. 5000 rpm 離心一分鐘收菌，重懸后取 100-200 μl 涂布到含相應抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量較大， 若全部涂板請選用直徑 15cm 培養皿 2-5 個）。將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養 13-17     小時。

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