從事多年的研發實驗，平時常常聽到客戶這樣問，為什么我也是用的這個感受態細胞，但轉化效率沒那么高？今天上海淳麥生物科研者為大家進行詳細講解，教你如何提高感受態細胞轉化率。

感受態轉化效率定義

轉化效率定義為轉化1μl質粒至給定體積的感受態細胞中所能產生的菌落形成單位（cfu）的數量。但是，轉化1μl質粒是不常見的。

實際上，轉化效率常以在適條件下轉化100pg—1ng高純度超螺旋質粒來計算。

計算轉化效率（TE）的公式為：

TE=菌落數/μg/稀釋度。

轉化效率計算可以用來做比較細胞或連接效率。下面列出了推薦轉化方法和一些技巧以幫助獲得實驗結果。

推薦方案

一、轉化方法

1. 冰上解凍細胞

2. 細胞中加入10ng—100ng的質粒DNA（1-5μl），混勻，切忌渦旋

3. 置于冰上30分鐘

4. 42熱激60秒或根據推薦條件進行熱激

5. 置于冰上5分鐘

6. 加入900μl室溫的SOC

7. 37震蕩（250rpm）培養60分鐘

8. 混勻細胞，切忌渦旋，并用SOC做10倍梯度稀釋

9. 每個稀釋比例取50-100μl稀釋液涂布于預熱的選擇平板上，37（SHuffle菌株30）過夜培養或按推薦條件培養

    

二、5分鐘轉化方法

（與上述方法相比只有10%的轉化效率）

1. 手握解凍細胞

2. 細胞加入10ng—100ng的質粒DNA（1-5μl），混勻，切忌渦旋

3. 置于冰上2分鐘

4. 42熱激30秒或按推薦方案進行熱激

5. 置于冰上2分鐘

6. 加入900μl室溫的SOC或LB。快速取50-100μl涂布于選擇平板上，37過夜培養（SHuffle菌株30）

   注意：使用非氨芐青霉素時，需要37震蕩培養

    

轉化技巧

01、解凍

• 細胞在冰上解凍

• 管中的后一點感受態融化后，立即加入DNA

• 可以手握解凍細胞，但是一旦溫度高于0時，轉化效率就會下降

• 細胞與DNA冰浴

• 冰浴30分鐘。預計每縮短10分鐘會降低轉化效率2倍

   

02、熱激

• 溫度和時間取決于轉化體積和適用的容器，一般為42孵育60秒

   

03、生長

• 37生長1小時對于細胞恢復和抗生素抗藥性表達具有效果。預計每縮短15分鐘會有2倍的轉化效率損失

• SOC比LB培養基的轉化效率高2倍

• 震蕩或旋轉晃動試管可使轉化效率提高2倍

   

04、涂平板

• 選擇轉化效率不受溫度、濕度明顯影響的平板

• 溫暖而干燥的平板利于涂布，并能快速長出菌落

   

05、DNA

• 用于轉化的DNA應純化，并重懸于水中或TE緩沖液中

• 直接從連接產物中取10μl的DNA用于轉化，僅有2倍效率損失

• 為實現轉化，可通過柱離心或酚抽提和乙醇沉淀的方法純化DNA

• 適DNA用量比通常認為的要低，純化超螺旋pUC19的用量在100pg-1ng之間時轉化效率高。但是，隨著DNA用量增加至100ng，單次轉化反應中得到的總克隆數也會增多

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