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菌種保藏和復蘇具體的操作步驟
閱讀：97 發布時間：2025-5-27菌種保藏（culture preservation，culture collection）是保持微生物菌株活力和遺傳性狀的關鍵技術。在分子生物學研究中，經過基因編輯或改造的菌種通常非常珍貴且微量，因此需要進行妥善的保藏。以下是具體的操作步驟：
菌種保藏：
1. 將待保存的菌液與配好的甘油混合液按1:1比例混合，最終達到20%甘油濃度。配置40%（v/v）甘油滅菌水混合液。
2. 取2ml離心管或保菌管，加入500微升40%甘油-水混合液。
3. 用移液槍吸取500微升菌液，將槍頭深入液面以下緩緩加入。
4. 將離心管或保菌管放入-80℃冰箱保存。
5. 在保菌管上標明日期、菌種、抗性等詳細信息，以便日后識別。
菌液復蘇：
1. 復蘇保存的菌液可以進行后續操作。主要步驟如下：
2. 取含有抗性的LB培養基，每個培養管裝入約八毫升。所有操作均在無菌操作臺進行，以防污染。
3. 向每管加入100微升菌液，37℃、180rpm搖12小時。
4. 氨芐抗性配置：1g氨芐青霉素鈉溶解于10ml滅菌水中，過濾后-20℃保存。
5. LB培養基配置：10g氯化鈉、10g胰蛋白胨、5g酵母提取物溶于一升體系中，分裝到250ml錐形瓶，每瓶100ml。Amp抗性：100ml培養基加入100微升氨芐抗性。
通過這些簡單的步驟，你可以有效地保藏和復蘇珍貴的菌種，為后續的分子生物學研究提供堅實的基礎。