原理
分光光度計采用個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生定波長的光源，光線透過測試的樣品后，分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關系如下式:
A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度;
I。為入射的單色光強度;
I 為透射的單色光強度;
T 為物質的透射率;
k 為摩爾吸收系數;
L 為被分析物質的光程，即比色皿的邊長;
c 為物質的濃度;
物質對光的選擇性吸收波長，以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區，除某些物質對光有吸收外，很多物質本身并沒有吸收但可在定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應用標準品或對照品同時操作。
操作使用方法
1.接通電源，打開儀器開關，掀開樣品室暗箱蓋，預熱10分鐘。
2.將靈敏度開關調至"1"檔(若零點調節器調不到"0"時，需選用較。)
3.根據所需波長轉動波長選擇鈕。
4.將液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內，使管對準光路。
5.在暗箱蓋開啟狀態下調節零點調節器，使讀數盤針向t=0處。
6.蓋上暗箱蓋，調節"100"調節器，使管的t=100，針穩定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。
7.比色畢，關上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。
注意事項
1.該儀器應放在干燥的房間內，使用時放置在堅固平穩的作臺上，室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發亮不穩定。
2.使用本儀器前，使用者應該了解本儀器的結構和作原理，以及各個操縱旋鈕之能。在未按通電源之前，應該對儀器的安性能行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調節旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。
3.在儀器尚未接通電源時，電表針于"0"刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲行調節。
日常維護
分析儀器作者要懂得儀器的日常維護和對主要標的簡易測試方法，自己經常對儀器行維護和測試，以保證儀器作在狀態。
、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機械件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機械分的誤差或性能下降;成光學件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止作，從而影響儀器壽命。維護保養時應定期加以校正。應具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設備，別是地處南方地區的實驗室。
二、環境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機械系統的靈活性、降低各種限位開關、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是成學件鋁膜銹蝕的原因之。因此定期清潔，保障環境和儀器室內衛生條件，防塵。
三、儀器使用定周期后，內會積累定量的塵埃，由維修程師或在程師導下定期開啟儀器外罩對內行除塵作，同時將各發熱元件的散熱器重新緊固，對光學盒的密封窗口行清潔，時對光路行校準，對機械分行清潔和的潤滑，后，恢復原狀，再行些的檢測、調校與記錄。
