單細(xì)胞測(cè)序保證了測(cè)量的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性
單細(xì)胞測(cè)序與普通測(cè)序不同在于普通測(cè)序所提取的RNA源于樣本中的多個(gè)細(xì)胞，所以普通測(cè)序的結(jié)果不可避免的會(huì)受到不同細(xì)胞間異質(zhì)性的影響，而單細(xì)胞測(cè)序則是針對(duì)單個(gè)細(xì)胞的基因組進(jìn)行測(cè)序，能夠更好地幫助我們認(rèn)識(shí)細(xì)胞與細(xì)胞之間的差異。
同一組織中的細(xì)胞間都是存在異質(zhì)性的，更不必提不同組織、不同系統(tǒng)中細(xì)胞的異質(zhì)性了。這一異質(zhì)性，會(huì)影響我們對(duì)細(xì)胞基因功能認(rèn)知的準(zhǔn)確性。單細(xì)胞測(cè)序能夠幫助我們了解那些難以培養(yǎng)的微生物的基因組功能、了解遺傳鑲嵌功能在普通生物學(xué)功能或是疾病發(fā)生中的作用、了解腫瘤內(nèi)在異質(zhì)性對(duì)腫瘤發(fā)展以及耐藥性的影響、重新定義細(xì)胞亞型等等。
確實(shí)相較于群體細(xì)胞測(cè)序，單細(xì)胞樣品的分離、獲取難度會(huì)大幅度增加。雖然很難，但是面對(duì)如此前沿的領(lǐng)域，科研人員“前仆后繼”開(kāi)發(fā)出了多種方法獲得單細(xì)胞。剛開(kāi)始出現(xiàn)的應(yīng)該是“顯微鏡下人工挑選”，比較費(fèi)事但不需要特殊儀器；激光顯微切割儀、流式細(xì)胞儀也常見(jiàn)于各大研究所的儀器中心，但是這些技術(shù)對(duì)細(xì)胞活率有一定影響，通量也不高。
隨著人們科研需求的逐漸增長(zhǎng)，已不滿足于傳統(tǒng)的分離技術(shù)，因此市面上出現(xiàn)了基于微流體、納米孔芯片技術(shù)的高通量方法，一次能分選出至少上千單細(xì)胞。其中我們判斷基于納米孔芯片技術(shù)且?guī)Ч鈱W(xué)組件的系統(tǒng)，以其能高通量挑選出“活的單細(xì)胞”、兼容各種尺寸細(xì)胞，或會(huì)是未來(lái)更看好的方向。
為了減少偏差，實(shí)驗(yàn)人員在自身實(shí)驗(yàn)素質(zhì)提升的基礎(chǔ)上，可以選擇更為的移液設(shè)備，如量程合適的移液槍，或者在處理多個(gè)樣品時(shí)，使用8通道排槍替代單通道移液槍。也可以選擇更為簡(jiǎn)便操作的文庫(kù)構(gòu)建試劑盒，如單管操作、一步法完成、過(guò)程中無(wú)需純化的產(chǎn)品，盡量減少樣品的損失。當(dāng)然，現(xiàn)在也流行使用自動(dòng)化工作站，替代人工完成文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程中移液、孵育、純化等操作。
單細(xì)胞測(cè)序?qū)夹g(shù)要求比較高，每個(gè)環(huán)節(jié)都可能決定實(shí)驗(yàn)的成敗。因此為了盡可能使大家避開(kāi)“雷區(qū)”，輕松得到準(zhǔn)確的單細(xì)胞分析結(jié)果，我們團(tuán)隊(duì)特別策劃了一個(gè)單細(xì)胞測(cè)序專題：“手把手”告訴大家如何獲得想要的單細(xì)胞，如何制備高質(zhì)量的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組、全基因組、免疫組庫(kù)的測(cè)序文庫(kù)，如何減少實(shí)驗(yàn)偏差。
