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                     黑化大家鼠肺成纖維細(xì)胞；NRm操作流程

已是十一月末。一年又快到頭了。回憶千絲萬縷如煙霧繚繞，即使我用文字頻繁的記錄下生活的種種鏡頭，也握不緊，抓不住它。許多瑣碎和細(xì)節(jié)，無法用任何形式表達(dá)，唯有腐爛成尸骸，消融在遠(yuǎn)去的歲月里。接下來介紹   黑化大家鼠肺成纖維細(xì)胞；NRm操作流程

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽長期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。

操作步驟 :

　　1、將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。 　　

2、加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。 　　

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時(shí)間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)將胰酶棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。 　　觀察消化也可以用肉眼，當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化。一般室溫消化時(shí)間約為1—3分鐘。 　　

4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。 　　附：消化液配制方法： 　　稱取0.25克胰酶蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。