ELISA全稱叫酶聯免疫吸附試驗，ELISA原理：測定時，受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與溶液中的其他物質分開，再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應結合在固相載體上，加入酶反應的底物后，底物被酶催化成有色產物，產物的量與標本中要檢測的目標物質的量直接相關，故可根據顏色的深淺進行定性或定量分析。

   

影響ELISA檢測試劑盒測定結果操作因素如下：

1、嚴格按照試劑說明書進行操作。

2、檢測前應將試劑放置室溫平衡半小時，洗滌液應現用現配，同時觀察濃縮洗滌液中有無結晶，若有結晶應放37℃水浴中融化后方可使用。加入底物TMB時應注意有無顏色變化，若已顯色則可能過期或變質，也不可使用。

3、加樣后及時放入孵育箱。標本較多時，要分批操作。按照說明書步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。

4、封板溫育時，各孔一定要封嚴，防止陽性標本的液體蒸發，不會引起孔間的污染，產生周邊現象從而導致“花板“的出現。

5、應保證酶標版清潔，整個操作過程中保證酶標版不接觸次氯酸。

6、加酶試劑后用吸水紙在酶標版表面輕拭吸干。

7、合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。

8、手動洗板時，加洗液要快速，沒有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應新鮮配制，以免被其他試劑污染，或染菌。加好洗液后浸泡 30s-1min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍板，選用無粉塵和碎屑的吸水紙。需要用力拍板，使孔內沒有可見液體掛壁；但也不能太重，不能讓樣品干太久。酶標板拍干后立即做后續的加液。

9、用洗板機洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完版后在吸水紙（選擇干凈，無塵的吸水材料）上輕輕拍干。若血清中的纖維蛋白或洗滌液中有結晶，將堵塞洗板機針孔，造成全堵或半堵狀態，以致使未結合的酶標記物不能*洗脫，而使最后底物顯色時加深，造成假陽性或花板。廢液瓶裝滿后應及時清空，以防止廢液回流對管道的污染，而使洗滌不*，造成花板。洗板結束后應用蒸餾水*清洗管道，以防止廢液在管道中的殘留。洗滌次數及加液量不可*按照試劑說明書設定，應根據本實驗室的實際情況來設定，開展新項目前，應做好驗證工作，根據洗滌的效果來決定洗滌的次數和加液量。同時應根據儀器維護保養程序，定期對洗板機進行維護保養。

10、加樣量的準確與否，直接影響抗原抗體結合物的濃度，直至最后顯色的深淺。吸嘴插入血清不可太深，若插入太深，吸嘴外壁可能粘連太多血清，輕微的抖動動即可將吸咀外壁的血清濺入其它包被孔中，造成交叉污染。加樣時應盡可能的垂直加樣，并加在包被孔的底部，不可加在孔的上部。標本量大時，可考慮使用排槍加試劑，可提高速度，但使用排槍時應注意吸嘴一定要裝好，不可松動，否則會影響加樣量的準確度。加樣時保持顯色劑不外流，顯色劑應避免接觸金屬器械。加終止液時應避免產生氣泡。

11、加樣時間間隔對結果也有一定的影響，在競爭抑制法試驗中，理論上應該是標本與酶標抗體混合后同時加入反應孔，若標本先于酶標抗體加入反應孔，則標本會先與包被抗體進行反應，造成特異性假陽性。若是有干擾物質存在時表現明顯，在公平條件下，干擾物質與包被抗體的結合能力會低于標本，而在非公平條件下，干擾物質會優先與包被抗體進行結合，出現假陽性。做HBcAb項目時，若標本與酶加樣時間間隔太長，會引起吸光度的趨勢性變化，會造成吸光度的降低。特別是針對臨界值標本，出現假陽性。

12、洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液，各種試劑盒的洗液不要混用。洗液需要稀釋時，應按要求稀釋。配制洗液應用新鮮的和高質量的超純水或雙蒸水，電導率小于1.5μS/cm,洗液如果結晶應待其溶解后配制。配制后要測定其pH值，使其范圍在7.2-7.4之間。