化工儀器網
技術文章
冷凍細胞凍結操作步驟
閱讀：384 發布時間：2022-1-11冷凍細胞凍結程序:
1. 根據細胞株數據單zhi定之基礎培育基種類、血清種類和其它zhi定之成份和份額，制備培育基。絕大多數之細胞均無法當即適應不同之基礎培育基或不同之血清種類，若因試驗需要，有必要有所不同時，必須以緩慢份額漸次改變培育基組成，確定細胞適應后，方進行所需之試驗。
2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清)，對細胞而言差異極大，請必須根據細胞株資料單zhi定之血清種類培育之。
3. 將培育基置于37 °C 水槽中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。取出冷凍管，當即放入37 °C 水槽中快速凍結，水面高度不行接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易產生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內悉數融化后，以70%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺。
4. 根據細胞種類和濃度，于無菌操作臺內取10 ml培育基加至T25 或T75 flask中。取出已凍結之細胞懸浮液，慢慢參加T25或T75 flask 內之培育基，混合均勻，放入37 °C，5 % CO2培育箱培育。
5. 對絕大多數細胞而言，1 % 以下之冷凍保護劑DMSO，不會對細胞之貼附或活化有不良影響，不需馬上由凍結.細胞中去除，待第二天確定細胞成長或貼附良好后再去除即可。
針對極少數因對DMSO 靈敏或會形成細胞分化之細胞，需當即去除DMSO 者，則可將凍結后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培育基中，離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，參加適量新鮮培育基，將細胞均勻混合后，轉移至培育瓶中，再放入37 °C，5 % CO2 培育箱培育。