小鼠視乳頭星形膠質原代細胞

小鼠視乳頭星形膠質細胞分離自視乳頭；視乳頭位于黃斑區鼻側附近，境界清楚，呈白色、圓盤狀，因此也稱為視盤。視網膜上視覺纖維在此匯集，并于此穿出眼球向視中樞傳遞。視乳頭中央有一小凹陷區，稱為視杯或生理凹陷。視乳頭是視纖維聚合組成視的起始端，它沒有視細胞，因而沒有視覺，在視野中是生理盲點。視乳頭是開角型青光眼早受損的部位，星形膠質細胞是視乳頭處主要的膠質細胞類型，可為視網膜節細胞無髓鞘的軸突提供結構和生物支持。青光眼視病變是全球不可逆性致肓眼病。青光眼視病變以視網膜節細胞軸突喪失并伴有視乳頭處細胞外基質重坦為主要特征。導致視網膜節細胞喪失的病理生理機制尚未闡明，膠質細胞對調控元微環境起多重作用，越來越多的證據表明膠質細胞町能對系統發育、損傷、修復及再生起極為關鍵的作用。視乳頭星形膠質細胞胞體多扁平，體積較大，形狀多呈不規則的多邊形，突起較粗，胞核為橢圓形，核仁清晰可見，核周有較密集物質，胞質稀疏，骨架結構良好，明顯不同于長梭形的成纖維細胞形態。

產品名稱：小鼠視乳頭星形膠質細胞

組織來源：眼球

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的小鼠視乳頭星形膠質采用-膠原酶聯合消化法、結合差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠視乳頭星形膠質經GFAP免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。