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詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的兔關節軟骨采用膠原酶聯合蛋白酶消化制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的兔關節軟骨經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 兔關節軟骨原代細胞 | 組織來源 | 關節軟骨組織 |
英文名稱 | Rabbit Articular Chondrocyte Cells | 貨號 | YS-01X7003 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔關節軟骨細胞分離自關節軟骨組織；關節軟骨屬于透明軟骨，表面光滑、呈淡藍色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結締組織的膠原纖維構成的基本框架，這種框架呈半環形，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下面的骨質上，上端朝向關節面，這種結構使關節軟骨緊緊與骨結合起來而不會掉下來，同時當受到壓力時候，還可以有少許的變形，起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間，散在分布著軟骨細胞，軟骨細胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細胞組成，這些軟骨細胞維持關節軟骨的正常代謝。關節軟骨沒有支配，也沒有血管，其營養成分必須從關節液中取得，而其代謝廢物也必須排至關節液中，關節軟骨的這種營養代謝必須通過關節運動，使關節軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關節運動對于維持關節軟骨的正常結構起重要的作用。關節軟骨細胞位于關節軟骨陷窩內。幼稚的關節軟骨細胞位于關節軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關節軟骨表面平行，越向深層的關節軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質弱嗜堿性，常見數量不一的脂滴。成熟的關節軟骨細胞多2-8個成群分布于關節軟骨陷窩內，這些關節軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，關節軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網和發達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，關節軟骨細胞收縮為不規則形，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙。體外培養的關節軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
培養信息：
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態佳
消化液 0.25%
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
HFTF細胞，人胚胎眼Tenon's囊成纖維細胞 遲緩真桿菌/遲緩埃格特菌 小耳豬肺細胞;SEP-L2 | Rhesus antibody Rh GDF8 生長分化因子8/肌肉抑制素抗體 規格 0.2ml |
P I NP(Human procollagen I N-terminal peptide) ELISA Kit 人Ⅰ型前膠原N端前肽Multi-class antibodies規格： 48T | IgG/AP 堿性0酸酶(AP)標記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml |
ILVBL： 乙酰乳酸合成酶蛋白抗體 0.2ml | PGE2 ELISA Kit 大鼠前列腺素E2 96T |
Rhesus antibody Rh Renin 腎素/血管緊張素形成酶Ren1抗體 規格 0.1ml | Anti-Leptin receptor(long) /FITC 熒光素標記瘦素受體抗體(長)IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-Stathmin (Ser16) 0酸化原癌基因蛋白18抗體 規格 0.1ml | MHC I /RLA I (Rabbit major histocompatibility complex I ) ELISA Kit 兔主要組織相容性復合體Ⅰ類 96T |
CCL21 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CCL21 / 6Ckine 蛋白 | 大鼠腸動脈內皮細胞培養基 100mL |
CCRF-CEM [CCRF CEM]人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞 The CCRF-CEM [CCRF CEM] human acute lymphoblastic leukemia T lymphocytes 1640+10%Hyclone 滅活血清 | EGF Protein Human 重組人 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 標簽) |
人胚肺二倍體細胞;KMB-17 | 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-163 |
人小腸平滑肌細胞培養基 100mL | 人肺泡上皮細胞裂解物HPAEpiCL |
ECV304細胞，人臍靜脈內皮細胞株 人小細胞肺癌細胞,NCI-H345細胞 CL-0403NCI-H524(人非小細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2 | 兔關節軟骨原代細胞PGE2 ELISA Kit 大鼠前列腺素E2 96T |
HGC-27 人胃癌細胞(未分化) | CA10 Others Human 人 CA10 人細胞裂解液 (陽性對照) |
PRLR Others Mouse 小鼠 PRLR / Prolactin receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H103胎兒真皮成纖維細胞培養基100mL |
人羊膜細胞;WISH | Rhesus antibody Rh APBA3/Mint3/X11gamma β淀粉樣前體蛋白結合蛋白3抗體 規格 0.2ml |
beta IV Tubulin： 微管蛋白β4抗體 0.2ml | KM小鼠網織細胞肉瘤瘤株;LⅡ |
Anti-VEGF(Rabbit)/FITC 熒光素標記血管內皮生長因子抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml | PTK9： 蛋白酪酸激酶9抗體 0.2ml |
Anti-CDK7/Cyclin H/MAT1 /FITC 熒光素標記周期素依賴性激酶7抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml | CCL21 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CCL21 / 6Ckine 蛋白 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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