詳細介紹
細胞名稱 雜交瘤(B類);Z2310B6B11B1G4F3C11培養
形態特性 淋巴母細胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 可產生單克隆抗體;凍存前做支原體去除
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 保持細胞密度在1×105~1×106 cells/ml之間,每周換液2~3次
傳代情況
凍存條件 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 B類
雜交瘤(B類);Z2310B6B11B1G4F3C11培養操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。
Anti-PADI4/PAD4 /FITC 熒光素標記關節炎相關基因抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgM/Biotin 生物素化兔抗大鼠IgMMulti-class antibodies規格: 0.1ml
周期素C抗體 Anti-Cyclin C 0.1ml
Rabbit Anti-Monkey IgM/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗猴IgM 0.1ml
FBXO31 英文名稱: F-box蛋白家族FBXO31抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-VAV3(Tyr173) 磷酸化鳥嘌呤核苷酸交換因子VAV3抗體 規格 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgM/Biotin 生物素化兔抗大鼠IgMMulti-class antibodies規格: 0.1ml
Rat Caspase-1 大鼠Caspase-1Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-E.coli/EPEC 抗普通大腸埃希菌菌體蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mucin 4/Muc4 粘蛋白-4抗體 規格 0.1ml
Human Protein C ELISA Kit 人蛋白C 96T
SATB2 英文名稱: DNA結合蛋白2抗體 0.2ml
CSFV 英文名稱: 豬瘟病毒抗體 0.1ml
Anti-E.coli/EPEC 抗普通大腸埃希菌菌體蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
TGF- Beta (Rabbit Transforming Growth factor Beta) ELISA Kit 兔子轉化生長因子β 96T
MAML1 英文名稱: 主導控制樣蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的驢抗豚鼠IgG 規格 0.1ml
TSP-1(Mouse thrombospondin 1) ELISA Kit 小鼠血小板反應蛋白/凝血酶敏感蛋白1Multi-class antibodies規格: 48T
phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491) 英文名稱: 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體 0.1ml
Anti-CDK4/FITC 熒光素標記周期素依賴性激酶4抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
IGFBP-6(Mouse Insulin-like growth factor binding protein 6) ELISA kit 小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白6Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-CA15-3/FITC 熒光素標記癌相關抗原抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh envelope glycoprotein (Dengue virus type-2) 登革熱病毒抗體 規格 0.2ml
BCGF(Human B cell growth protein) ELISA Kit 人B細胞生長因子 96T
Phospho-MEF2A(Thr319) 英文名稱: 磷酸化肌細胞增強因子2抗體 0.1ml
ASB4 英文名稱: 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族4抗體 0.2ml
Anti-CA15-3/FITC 熒光素標記癌相關抗原抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml