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ELISA試劑盒洗滌很重要及抗體濃度須優化
閱讀:481 發布時間:2019-3-27ELISA試劑盒實驗的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著
洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個實驗
。在實驗結束時,我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結果的信噪比。背景
噪音會影響您對結果的判斷。如何降低ELISA的背景,下面有一些tips。
洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊,其實很重要,因為如果未結合的材料(如非特異結合的抗體或檢測試劑)
殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非
特異結合反應。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數。
抗體濃度須優化
我們通常會follow師兄師姐留下來的操作步驟,但是如果試劑稍有不同,則可能需要優化抗體
的量。記住,非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點,切勿使用過多的一抗或二抗。
檢測試劑要適量
另一點也很顯而易見:切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導致
高背景。也不要顯色過度,如有必要,優化一下何時應加入終止液。
如果您的ELISA不幸地遇到了高背景,那么也無需太擔心,依次查看ELISA系統中的組分,
并排除可能存在的問題。悉心優化,相信很快就會有漂亮的結果。