MC3T3-E1subclone14小鼠胚胎成骨細胞系從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細胞系中分離出一系列亞克隆。 從含抗壞血酸培養基生長的成骨細胞中選擇高或低成骨細胞分化、礦化的亞克隆。 MC3T3亞克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCC CRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機磷酸鹽中生長表現出高水平的成骨細胞分化

MC3T3-E1subclone14小鼠胚胎成骨細胞系背景資料：

 從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細胞系中分離出一系列亞克隆。 從含抗壞血酸培養基生長的成骨細胞中選擇高或低成骨細胞分化、礦化的亞克隆。 MC3T3亞克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCC CRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機磷酸鹽中生長表現出高水平的成骨細胞分化。 它們10天后形成一個礦化良好的細胞外基質（ECM）。 MC3T3亞克隆24（ATCC CRL-2595）和MC3T3亞克隆30（ATCC CRL-2596）在抗壞血酸中生長表現出很差的成骨細胞分化。 不形成ECM， 可以作為亞克隆4和14的陰性對照。 礦化的亞克隆選擇的表達作為成骨細胞標記的mRNA，及唾液酸糖蛋白（BSP），骨鈣素（OCN），和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關蛋白受體的mRNA。 高或者低的分化潛能的亞克隆在培養中生產出相似數量的膠原質，表達可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細胞相關轉錄因子。 植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亞克隆形成與骨類似的形成小骨的編織骨，低分化細胞只是產生纖維組織。 這些細胞系是研究體外成骨細胞分化的好模型，尤其是ECM信號。 它們和原代培養顱頂成骨細胞的行為類似。

規格：5×105cells/瓶
培養條件：37℃，5% CO2，PH值7.2~7.4，無菌恒溫培養。
細胞數量：1× 106個
細胞傳代：1:4~1:6傳代；每周換液2~3次
細胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
培養條件:DMEM（高糖） +10% FBS；37℃，5% CO2
傳代方法:建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:90%FBS+10%DMSO
細胞凍存：液氮凍存?????

T25瓶細胞處理方法

收到MC3T3-E1subclone14小鼠胚胎成骨細胞系后，檢查外包裝是否完整，細胞培養瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

3. 預熱*培養基（含1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養基。放到37度培養箱培養。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

②若細胞密度較大，達到80%以上，將細胞傳代培養。

注：

培養瓶里的培養基血清濃度為5%，建議更換成自己配好的新鮮培養基。由于運輸過程中的問題，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況，這時請在拍照后將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天；同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基。（這里是針對原來*培養基FBS濃度是10%的情況，如果原來FBS濃度是20%，可以增加到25%FBS濃度）   收到細胞后如細胞狀態不佳或培養中遇到問題，請當天反饋并提供圖片，且保存前三天照片以便分析。7天內反饋，細胞本身問題免費重發如人為原因導致可根據實際情況酌情處理；7天內未接到任何反饋視為合格，不予免費售后。