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人乙肝e抗體(HbeAb)ELISA試劑盒使用說明書
閱讀：199 發布時間：2023-7-26本試劑盒僅供研究使用。
96T
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清,血漿樣本中乙肝e抗體(HbeAb)表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人乙肝e抗體(HbeAb)表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中乙肝e抗體(HbeAb)相結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人乙肝e抗體(HbeAb)的存在與否。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 陽性對照 | 0.5ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陰性對照 | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 說明書 | 1份 |
4 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 10 | 封板膜 | 2張 |
5 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 11 | 密封袋 | 1個 |
6 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。待測樣品孔中加待測樣本50μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，
3. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
5. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘
8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
9. 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算和結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為乙肝e抗體(HbeAb)陰性
陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為乙肝e抗體(HbeAb)陽性。
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月