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免疫組化問題解答
閱讀：489 發(fā)布時(shí)間：2021-3-91、染色過強(qiáng)？
- 原 因
- 解決方法
- 抗體濃度過高或孵育時(shí)間過長
- 降低抗體滴度、抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4度過夜
- 孵育溫度過高超過37度
- 一般在室溫20-28度
- DAB顯色時(shí)間過長或濃度過高
- 顯色時(shí)間不超過5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)
2、非特異性背景染色？
- 原 因
- 解決方法
- 操作過程中沖洗不充分
- 每步?jīng)_洗3次每次5分鐘
- 組織中含過氧化物酶未阻斷
- 可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時(shí)間延長
- 組織中含內(nèi)原性生物素
- 正常非免疫動(dòng)物血清再封閉
- 血清蛋白封閉不充分
- 血清蛋白封閉不充分
3、染色弱？
- 原 因
- 解決方法
- 抗體濃度過低、孵育時(shí)間過短
- 提高抗體濃度、孵育時(shí)間不能少于60分鐘
- 試劑超過有效使用時(shí)間
- 應(yīng)更換試劑
- 操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干
- 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
使試劑稀釋 （應(yīng)防止切片干燥） - 室溫太低，低于15度
- 要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4度冰箱過夜
- 蛋白封閉過度
- 封閉不要超過12分鐘
4、染色陰性？
- 原 因
- 解決方法
- 操作步驟錯(cuò)誤
- 應(yīng)重試，設(shè)陽性對(duì)照
- 組織中無抗原
- 設(shè)陽性對(duì)照以驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果
- 一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤
- 仔細(xì)確定一抗二抗種屬無誤