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綠色熒光蛋白標記試劑盒

 

一. 試劑盒說明

綠色熒光蛋白1962年在一種學名Aequoreavictoria的水母中發現。其基因所產生的蛋白質，在藍色波長范圍的光線激發下，會發出綠色螢光。這個發光的過程中還需要冷光蛋白質Aequorin的幫助，且這個冷光蛋白質與鈣離子(Ca2+)可產生交互作用。本產品將綠色熒光蛋白的基因插入慢病毒介導的載體中，通過flap-Ub啟動子過表達從而作為報告基因，在細胞中表達。常用于細胞標記后移植追蹤，從而評估移植后細胞的歸巢以及治療效果等。

二.試劑盒組份

組份	Cat：	儲存條件
綠色熒光蛋白標記液	1 ml	4 ℃
polybrene	8 μg/ml	4℃

 

三. 注意事項

綠色熒光標記液避免反復凍融，操作時要戴手套和口罩。該產品僅限于非臨床性科研使用。

四. 操作步驟

細胞傳代培養到6孔板或者6cm盤中12-16小時后，將綠色熒光蛋白標記液0.3ml（6孔板一個孔中）或者0.5ml（6cm盤）分別與新鮮細胞培養液混勻，比例為0.3ml綠色熒光蛋白標記液中加入0.7ml新鮮培養液和1.0μl polybrene（終濃度8ng/ml），0.5ml綠色熒光蛋白標記液中加入1.5ml新鮮培養液和2μl polybrean（終濃度8ng/ml）。預混好的綠色熒光蛋白標記液加入到目的細胞培養皿中，此時細胞密度不宜超過60%。2個小時之內每間隔15-30min輕輕晃動被標記的細胞培養皿，可以達到更好的標記效果，2小時之后培養皿中補充等體積的新鮮培養液，過夜培養后更換成新鮮培養液。48小時之后，在熒光顯微鏡下觀察標記綠色熒光效率。