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貨號:                                                   規(guī)格：50管/48樣

總膽固醇（total cholesterol，TC）含量測定試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：正式測定之前選擇2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

產品內容：

    試劑一：異丙醇50mL（自備）。

TC 工作液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。

TC 標準品：液體1mL×1 支，5μmol/mL，4℃保存。

產品說明：

TC 包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC 是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽固醇酯轉化為FC；進一步利用膽固醇氧化酶催化FC 氧化，生成△4-膽甾烯酮和H2O2；后利用過氧化物酶催化H2O2 氧化4-氨基安替比林和酚，生成紅色醌類化合物；在500nm 有特征吸收峰，其顏色深淺與TC 含量成正比。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、可調式移液槍、1mL 玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水。

操作步驟:

一、TC的提?。?/span>

1、 組織中TC的提取：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清，即TC待測液。

2、 細胞、細菌中TC的提?。合仁占?00-500萬細胞或細菌到離心管內，棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強度20％，超聲2s，停1s），8000g 4℃離心10min，取上清，即TC 待測液。

3、 血清（漿）等樣品：直接測定。

二、測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min，調節(jié)波長到500 nm，蒸餾水調零。

2. TC 工作液置于37℃水浴30min。

3. 標準管：在1mL 玻璃比色皿中依次加入20 μL TC 標準品和980μLTC 工作液，迅速混勻，5min 后于500nm 處比色，記為A 標準管。

4. 測定管：在1mL 玻璃比色皿中依次加入20 μL TC 待測液和980μLTC 工作液，迅速混勻，5min 后于500nm 處比色，記為A 測定管。

注意：標準管只需測定一次。血鈣濃度計算：

三、計算公式：

1. 血清（漿）中TC 含量：

TC（μ mol /dL）= C 標準液×A 測定管÷A 標準管×100 mL

= 500×A 測定管÷A 標準管

C 標準液：5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。

2. 組織中TC 含量：

(1)按樣本蛋白濃度計算

TC（μ mol/mg prot）= C 標準液×A 測定管÷A 標準管÷Cpr

= 5×A 測定管÷A 標準管÷Cpr

(2)按樣本質量計算

TC（μ mol / g）= C 標準液×A 測定管÷A 標準管÷W

= 5×A 測定管÷A 標準管÷W

C 標準液：5μmol/mL；樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g/mL

3. 細胞、細菌中TC 含量：

TC（μ mol /10⁴ cell）= C 標準液×A 測定管÷A 標準管÷細菌或細胞（10⁴ cell /L）

= 5×A 測定管÷A 標準管÷細菌或細胞（10⁴ cell /L）

C 標準液：5μmol/mL。

注意事項：

。低檢出限為1mmol/L。