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UDPG焦磷酸化酶（UPG）測試盒
閱讀：730 發布時間：2020-11-12測定意義
UDPG 焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的關鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活 化，將 1-磷酸葡萄糖與 UTP 分子合成為 UDP-葡萄糖（UDPG）。
測定原理
UGP 可逆催化反應生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下 將 NADP 轉化為 NADPH，340nm 的吸光值增加速率反映了 UGP 活性。
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose
pyrophosphosphprylase，UGP）試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
UDPG 焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的關鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活
化，將 1-磷酸葡萄糖與 UTP 分子合成為 UDP-葡萄糖（UDPG）。
測定原理
UGP 可逆催化反應生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下
將 NADP 轉化為 NADPH，340nm 的吸光值增加速率反映了 UGP 活性。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板。
試劑組成和配制
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解。
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解。
試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解。
試劑五：液體 2mL×1 瓶，4℃保存。
酶液提取
1. 組織：按照質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL
提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清置冰上待測。
2. 細胞：按照細胞數量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500
萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，
總時間 3min）；然后 4℃，10000g 離心 10min，取上清置冰上待測。
3. 液體：直接檢測。
測定操作
1. 紫外分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長至 340nm，蒸餾水調零。
2. 取 1mL 石英比色皿，依次加入 100μL 試劑一，20μL 試劑二，20μL 試劑三，20μL 試劑
四，20μL 試劑五，20μL 粗酶液，充分混勻，記錄 340nm 處 30s 的吸光值 A1 和 330s 的
吸光值 A2，△A=A2-A1
計算公式
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按照樣本蛋白濃度計算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。
UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。
UGP（nmol/min /g）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W
（3）按照細胞數量計算
酶活單位定義：每 104 個細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。
UGP（U/104
cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×細胞數量÷V 樣總) ÷T
=321.54×ΔA÷細胞數量
（4）按照液體體積計算
酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。
UGP（nmol/min /mL）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T=321.54×ΔA
V 反總：反應體系總體積，0.2mL；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103
L / mol /cm；d：比
色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反
應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g
b.使用 96 孔板測定的計算公式如下
（1）按照樣本蛋白濃度計算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。
UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。
UGP（nmol/min /g）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W
（3）按照細胞數量計算
酶活單位定義：每 104 個細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。
UGP（nmol/min /104
cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×細胞數量÷V 樣總) ÷T
=643.08×ΔA÷細胞數量
（4）按照液體體積計算
酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。
UGP（nmol/min /mL）=ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T=643.08×ΔA
V 反總：反應體系總體積，0.2mL；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103
L / mol /cm；d：比
色皿光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：
反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g
注意事項
配制好的試劑二、試劑三、試劑四 3 天內使用完。