甘油三酯（TAG）是血液中的一種脂質，作為能量來源，并在代謝中發揮關鍵作用。甘油三酯是消化過程中分解膳食脂肪的最終產物。任何未被立即使用的多余碳水化合物和脂肪都會化學轉化為甘油三酯。在腸道中，分泌的酶脂肪酶水解甘油三酯的酯鍵，產生甘油和游離脂肪酸，這一過程稱為脂肪分解。腸上皮細胞隨后吸收并重新包裝這些片段，并與膽固醇結合形成乳糜微粒，一種主要的脂蛋白運輸顆粒。在肝臟中，肝脂肪酶也會分解甘油三酯，以從甘油三酯、膽固醇和載脂蛋白中組裝另一種脂蛋白顆粒（VLDL）。血漿甘油三酯水平通過VLDL和乳糜微粒顆粒的組裝和降解來調節。脂蛋白脂肪酶（LPL）是負責水解這些顆粒中甘油三酯核心的關鍵血漿脂肪酶。

艾美捷脂蛋白脂酶(LPL)活性測定試劑盒（#STA-610）利用一種熒光甘油三酯類似物作為脂肪酶底物。當未被水解時，底物保持在非熒光、猝滅狀態；然而，當在sn-1位置被LPL水解時，會產生一種可被熒光微孔板讀取器測量的熒光產物（激發波長480-485納米/發射波長515-525納米，建議截止波長495納米）（見測定原理）。脂蛋白脂肪酶（LPL）活性測定試劑盒是一種簡單的熒光測定法，可在96孔微孔板格式中定量測量血漿、血清和裂解液中的LPL活性。每套試劑盒提供的試劑足以進行多達100次測定，包括空白、LPL標準品和未知樣本。試劑盒包含LPL標準品，檢測靈敏度限為約1毫單位/毫升（見試劑盒組成中的單位定義）。除了LPL，該測定還可用于檢測內皮脂肪酶和肝脂肪酶活性。

相關產品：

1. STA-375：尿酸/尿酸酶測定試劑盒

2. STA-390：總膽固醇測定試劑盒

3. STA-391：HDL和LDL/VLDL膽固醇測定試劑盒

4. STA-397：血清甘油三酯定量試劑盒（熒光法）

5. STA-399：游離甘油測定試劑盒（熒光法）

脂蛋白脂酶(LPL)活性測定試劑盒組成（干冰運輸）：

1. LPL熒光底物（部件編號261001）：一個20微升琥珀色試管。

2. 10倍LPL測定緩沖液（部件編號261002）：兩個1.5毫升試管。

 注意：該緩沖液不含鈣或鎂。

3. 終止液（部件編號261003）：兩個1.5毫升試管。

4. LPL酶標準品（部件編號261004）：一個25微升試管，濃度為2500單位/毫升。

 注意：一個單位對應于在pH 8.0和40攝氏度下，使用三油酸甘油酯作為底物時，每分鐘釋放1微摩爾油酸的酶量。

未提供的材料：

1. 標準96孔熒光黑色微孔板

2. 37攝氏度培養箱

3. 配備激發濾光片（480-485納米）和發射濾光片（515-525納米）的熒光微孔板讀取器（建議截止波長495納米）

儲存條件：

將整個試劑盒儲存于-80攝氏度。通過分裝避免反復凍融。LPL熒光底物對光敏感，應保存在琥珀色試管中。

試劑準備：

- 1倍LPL測定緩沖液：用去離子水將10倍LPL測定緩沖液稀釋至1倍。攪拌至均勻。

- LPL熒光底物：在測定準備期間，將LPL熒光底物在室溫下解凍。使用前，用1倍LPL測定緩沖液將LPL熒光底物稀釋1:500。短暫渦旋至均勻。不要儲存稀釋后的溶液。

 注意：對于長期儲存，LPL熒光底物應分裝并冷凍于-80攝氏度，以避免反復凍融。

- 終止液：在37攝氏度下解凍終止液。對于長期儲存，終止液可在室溫或4攝氏度下保存。如果出現結晶，可在37攝氏度下短暫加熱溶液以重新溶解。

樣本準備：

- 血漿：用抗凝劑（如肝素、檸檬酸鹽或EDTA）收集血液，并通過倒置混合。在4攝氏度下以1000×g離心10分鐘。收集血漿上清液，避免干擾白色白細胞層。樣本應立即檢測或在-80攝氏度下冷凍保存，最長可達1個月。在測定前，血漿必須用1倍LPL測定緩沖液稀釋1:50至1:200。

- 血清：在無抗凝劑的試管中收集血液。讓血液在室溫下凝固30分鐘。以2500×g離心20分鐘。小心移除黃色血清上清液，避免干擾白色白細胞層。樣本應立即檢測或在-80攝氏度下冷凍保存，最長可達1個月。在測定前，血清必須用1倍LPL測定緩沖液稀釋1:50至1:200。

- 細胞裂解液：通過以1000×g離心10分鐘收集10×10?個細胞。棄去上清液，用1毫升冷20毫摩爾/升Tris（pH 7.5）、150毫摩爾/升氯化鈉重懸細胞。勻漿或超聲處理細胞懸浮液。在4攝氏度下以10,000×g離心10分鐘。小心收集上清液，置于冰上以供即時使用。對于長期儲存，將裂解液在-80攝氏度下冷凍保存，最長可達1個月。在測定前，細胞裂解液必須用1倍LPL測定緩沖液進一步稀釋1:20或更高。

- 組織樣本：稱取200毫克組織并切成小塊。用冷PBS沖洗組織以去除紅細胞和x塊。在1毫升冷20毫摩爾/升Tris（pH 7.5）、150毫摩爾/升氯化鈉中勻漿處理切碎的組織。在4攝氏度下以10,000×g離心10分鐘。小心收集上清液，置于冰上以供即時使用。對于長期儲存，將勻漿在-80攝氏度下冷凍保存，最長可達1個月。在測定前，細胞裂解液必須用1倍LPL測定緩沖液進一步稀釋1:100或更高。

結果示例：

下圖展示了典型的LPL活性測定試劑盒結果。使用SpectraMax Gemini XS熒光光度計（Molecular Devices）在485/525納米濾光片組和495納米截止波長下進行熒光測量。以下數據僅供參考，不應用于解釋實際結果。  

脂蛋白脂肪酶標準曲線

脂蛋白脂酶(LPL)活性測定試劑盒文獻參考：

1. Goldberg, I. J., and M. Merkel (2001) Front Biosci 6: D388-405.

2. Olivecrona, G., and T. Olivecrona (2010) Curr Opin Lipidol 21: 409-415.

3. Wang, H., and R. H. Eckel (2009) Am J Physiol Endocrinol Metab 297: E271-288.