聚集體是聚集的、錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)的包涵體，當(dāng)泛素-蛋白酶體蛋白質(zhì)降解機(jī)制不堪重負(fù)時(shí)形成。通常，聚集體響應(yīng)細(xì)胞應(yīng)激而形成，并通過分離錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)提供細(xì)胞保護(hù)機(jī)制，最終通過自噬清除它們。此外，蛋白質(zhì)聚集體的形成是多種人類疾病的標(biāo)志，例如阿爾茨海默氏癥、帕金森氏癥、肌萎丨縮側(cè)索硬化癥或酒精性肝病。

艾美捷 Enzo蛋白聚集分析試劑盒提供了一種快速、特異性和定量的方法來標(biāo)記細(xì)胞中的聚集體，無需人工蛋白質(zhì)突變。

艾美捷 Enzo蛋白聚集分析試劑盒包含的 PROTEOSTAT ® Aggresome 檢測試劑是一種分子轉(zhuǎn)子染料。在溶液中，沿單個(gè)中心鍵的自由分子內(nèi)旋轉(zhuǎn)可防止熒光。PROTEOSTAT® _染料特異性地插入到通常存在于錯(cuò)誤折疊和聚集的蛋白質(zhì)中的四元蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的交叉β脊柱中，這將抑制染料的旋轉(zhuǎn)并導(dǎo)致強(qiáng)烈的熒光。

艾美捷 Enzo蛋白聚集分析試劑盒特點(diǎn)：

1、提供基于細(xì)胞的藥物反應(yīng)性測定，以在真實(shí)的細(xì)胞環(huán)境中鑒定與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的抑制劑

2、可靠且簡單的測定不需要非生理性蛋白質(zhì)突變或基因工程細(xì)胞系

3、在廣泛的條件下進(jìn)行驗(yàn)證，并使用小分子調(diào)節(jié)劑證明適用于篩選具有潛在治療價(jià)值的化合物

4、固定細(xì)胞檢測針對抗體共定位研究進(jìn)行了優(yōu)化

5、通過流式細(xì)胞術(shù)輕松量化聚集體和相關(guān)包涵體

6、可用于神經(jīng)退行性疾病、肝病、毒理學(xué)研究等的研究

PROTEOSTAT ®染料已在各種條件下和小分子調(diào)節(jié)劑得到驗(yàn)證，證明其適用于化合物篩選。此外，它適用于多重共免疫熒光，以在自噬和聚集體形成的背景下研究您感興趣的目標(biāo)。

圖：用試劑處理 K562 細(xì)胞以誘導(dǎo) ER 應(yīng)激和不*自噬，分別使用 Thapsigargin (Tg, 0.1 µM)、25、50 和 75 µM CQ處理 24 小時(shí)。使用蛋白酶體抑制劑 MG-132 (5 µM) 進(jìn)行陽性對照 24 小時(shí)。沉淀的細(xì)胞被固定和透化。然后根據(jù)說明使用 300 µl PROTEOSTAT® Aggresome Detection 試劑（Enzo Life Sciences）和 1 µg/ml DAPI（用于細(xì)胞周期測定）在室溫下將細(xì)胞標(biāo)記 30 分鐘。測定每種處理的 S 期 G1 以上和 G2m S 期以上的聚集傾向因子 (APF) 的相對增加，并與對照值進(jìn)行比較。與對照組相比，ER 應(yīng)激誘導(dǎo)劑、Tg 和 50 µM CQ 在 S 期比 G1 更能上調(diào)聚集體。